第二次pcr跑出来的条带和第一次pcr跑出来的位置不一样，这是什么原因？

可能是第一次的RNA有降解，逆转录出来的模板本身就有问题，所以p出来条带也有问题，太小了，你可以发个图片过来看看

1.确定一下你两个引物之间的产物大小应该是多少，2，然后看一下pcr的扩增时间是否一致。

首先你的确认你没有用错东西.
如果没有问题,二次PCR的话,那得看你的延伸时间和退火温度了.
2轮的退火温度最好调高些,以增强特异性.
延伸时间上,看你的产物大小.如果需要大条带,那延伸时间意义不大,最好能对一轮产物进行预期条带的回收后再做2轮,或者进行巢式PCR；要是需要小条带那就简单了,直接缩短延伸时间就好了.

主要是看自己设计的引物扩增片段长度，第一次的可能是引物二聚体