1双元载体的农杆菌转化1.1农杆菌感受态细胞的制备1.1.1. 取-70℃保存的EHA105于含50μg/ml链霉素平板划线，28℃培养。1.1.2. 挑取单菌落接种于5ml YM液体培养基中，220rpm 28℃振荡培养12-16 hr。1.1.3. 取2ml菌液转接于100ml YM液体培养基中，28℃220rpm振荡培养至OD600=0.5。1.1.4. 转入无菌离心管，5000rpm离心5min,去上清液。1.1.5. 加入10ml预冷的0.1M的CaCl2 ...
核酸序列的一般分析流程1.1 核酸序列的检索http://www.ncbi.nlm.nih.gov:80/entrez/query.fcgi?db=Nucleotide1.2 核酸序列的同源性分析1.2.1 基于NCBI/Blast软件的核酸序列同源性分析http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/blast.cgi1.2.2 核酸序列的两两比较http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/bl2.html1 ...
本版有较多关于promoter的讨论，其中不乏精彩好贴，本人也受益较多，现试着总结归纳了如下，希望对大家有用： 启动子是DNA分子可以与RNA聚合酶特异结合的部位，也就是使转录开始的部位。在基因表达的调控中，转录的起始是个关键。常常某个基因是否应当表达决定于在特定的启动子起始过程。启动子一般可分为两类: (1)一类是RNA聚合酶可以直接识别的启动子。这类启动子应当总是能被转录。但实际上也不都如此，外来蛋白质可对其有影响， ...
PCR技术在分子生物学领域的重要性自不必多说，各种新的PCR技术也不断涌现。引物的设计是进行各种PCR的重要前提条件。虽然现在有很多软件可以设计并评价引物，但在实际的PCR扩增过程中，必须对反应体系和反应条件进行优化，尤其是引物浓度，Mg2＋浓度，退火温度等。有时候无论我们如何优化，也拿不到目的产物，只能重新设计。鉴于在引物的设计和合成过程中所花费的时间、精力和财力（尤其对于新手而言），本着资源共享的原则，建立丁香 ...
New England Biolabs（NEB 公司）隆重推出蛋白质标记 SNAP-tag 最新技术，该项技术可以在活细胞及固定细胞中研究蛋白质的功能和定位。SNAP-tag 技术能将哺乳动物细胞体内蛋白质成像并且体外捕获蛋白质，为研究蛋白质提供了强有力的工具。其工作原理是：构建基因，表达融合蛋白质，再与多种荧光基团、生物素或磁珠形成共价结合。为了使用方便，NEB 提供两套系统：一套是标记物可以直接自我标记构建好的融合蛋白质（SNAP-tag 和 ...
微卫星DNA的研究进展1 微卫星DNA的概况1.1 微卫星DNA的构成和分布频率 微卫星DNA (microsatellite MS )，又称短串联重复序列(short tandem repeat STR)，是一类广泛存在于原核、真核生物基因组的DNA串联重复序列。STR核心序列(重复单位)2~6bp，多位于编码区附近，也可位于内含子、启动子、Alu序列中，其重复单位相同，以(CA)n、(GT)n、(CAG)n较常见，重复次数(n)多为15~60次，总长度一般 ...
分子生物学技术讨论区精华索引说明：分子生物学技术讨论区本由Yong主任提议开辟便于大家讨论分子生物学方面问题，但大量所要书籍的跟贴严重妨碍了对技术问题的讨论，导致该贴被锁定。然其中有不少精华帖子亦被淹没，偶心中不忍，奋战几日，将一些对大家可能有所帮助和启发的帖子集中于此，制成索引，有归纳不当之处，还请Yong主任及其他站友指出！基因表达与克隆方面：http://www.dxy.cn/bbs/thread/40236h ...
【CRISPR/Cas9系统的发现历史和应用-@华夏凯奇】-兼谈八卦。水平有限，不准确和班门弄斧之处，还望大家斧正。copyright@华夏凯奇一、CRISPR系统的发现-从细菌的获得性免疫说起CRISPR系统实际是细菌的一种获得性免疫系统。细菌被phage侵染之后，可以获得phage的DNA片段整合进基因组形成记忆，当再次遭到入侵时，从对phage形成免疫。1） 早在1987年，日本人在大肠杆菌中发现有串联间隔重复序列 ...
实时定量PCR完全手册方法简介所谓的实时荧光定量 PCR 就是 通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量 PCR 反应中，引入了一种荧光化学物质，随着 PCR 反应的进行，PCR 反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线。RT-qPCR是由三个步骤组成:1. 反转录:依赖反转 ...
EB（溴化乙锭）到底有多毒？随着每年各类化学物质进入市场，产生残留物的数量不断增加，健康和环境成为日益关注的问题。虽然许多实验中使用的化合物是有毒的，很多都是潜在的危险，但一些化学品没有适当的危险性分类，在日常实验中被广大科研工作者所忽略。什么是EB溴化乙锭？在研究数以千计的实验室残留性有毒物质，最值得一提的就是溴化乙锭（EB；3, 8-二氨基-5-乙基-6-phenylphenanthridinium甲基溴），该物质的潜 ...
基因组学研究概述段民孝（北京市农林科学院玉米研究中心）摘 要 本文对基因组学及相关学科的概念和研究内容做了概述。21世纪是生物时代和信息时代，基因组研究由结构基因组研究转向功能基因组研究，蛋白质组学成为研究重点。基因组学研究和信息学结合产生生物信息学成为今后各个产业的支撑点。关键词 基因组学；结构基因组学；功能基因组学；蛋白质组学；生物信息学Progress on the genomics studyAbstract The content of t ...
RNA 的完整性可以通过琼脂糖变性电泳分析检测,而含量则通过紫外分光光度计确定。常见的变性电泳有甲醛变性电泳，戊二醛变性电泳等。3.1 甲醛变性电泳检测RNA完整性一、材料、试剂和仪器1 材料: 植物总RNA 5-10μg2 试剂:1）加样运载缓冲液（Loading buffer）50% 甘油1mmol/L EDTA (pH 8.0)0.25%溴酚蓝25%二甲苯氰FF2）10×TAE Buffer3）5×甲醛凝胶电泳缓冲液：0.1mol/L MOPs (pH7.0)40mmol/L ...
总结一下最近构建质粒的心得，最近构建这个质粒已经有2个月了，一直没成功，到最近才有点眉目，只等测序了。其实质粒构建很容易，但有时候就是得不到结果，对于大片段（》3kb）要克隆到载体里，还是有难度的。首先介绍一下背景，我的质粒是pcDNA3.1+,片段是4371bp，刚开始我是用cDNA跑PCR，用的是高保真的酶，PCR产物也很完美，浓度也不低，用的是NotI单酶切，然后把质粒去磷酸化后再做连接，在百度上搜索到有人介绍说 ...
英《新科学家》评选出2008年十大典型基因话题 据《新科学家》网报道，2008年，有关基因的话题数不胜数，很多公司利用有关基因的科研成果赚了不少钱。遗传学关于基因对人类的行为有着决定性作用的说法也越来越流行，我们不得不重新用一种新的视角来看待我们的生活。《新科学家》网站为我们评选出了2008年十大最典型基因话题。让我们来一一回顾。1、测试自己的基因 预测自己的未来“基因检测”，这个过去几乎不为人知的科学名词，最近频繁出现在 ...
内容包括：1＝＝＝＝humanaebook：RNA Interference, Editing, and ModificationAbstract:A comprehensive collection of cutting-edge methods for elucidating the function of new genes and altering gene expression. These readily reproducible techniques can be used either in transient ...
在网上看到的，和大家分享一下。如果有错误，希望大家能指正～Vector：Primer(F)；Primer(R)pACT T7 T3pACT2 GAL4 AD pACT2-RpAS2-1 GAL4 BD pAS2-1.RpB42AD pB42ADF pB42ADRpBACPAK8 BAC1 BAC2pBK-CMV T7 T3PBS(SK/KS)/M13- M13F/T7 T3/M13RpBV220 PBV220F PBV220RpCAMBIA 1301(1300) P1 P2pCAMBIA 2300 M13R(-4 ...
我来整理生物芯片方面的资料第一部分 基础知识制造基因芯片的公司http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=64&id=1824869&sty=3&keywords=%BB%F9%D2%F2%D0%BE%C6%AC介绍基因表达谱芯片的课件http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=73&id=1817417&sty=3&keywords=%BB%F9%D2%F2%D0%BE%C6%AChttp:/ ...
1 Founding Members： Lin-4/let-7Ambros, V., and Moss, E. (1994) The heterochronic genes and developmental timing in C. elegans. Trends in Genetics 10, 123-127.Basyuk E, Suavet F, Doglio A, Bordonne R, Bertrand E. (2003) Human let-7 stem-loop precursors harbor features of RNase III cleavage products. ...
Humana press是全球最知名的生物期刊和书籍出版商之一，现已成为springer出版集团的成员。Methods in molecular biology和Methods in molecular medicine系列是Humana press出版的最经典的书籍。Methods in molecular biology主要内容为各种实验指南，内容新颖全面。下载连接：Vol 1 Proteinshttp://rapidshare.com/files/378 ...
DNA定量方法 核酸提取（包括DNA和RNA)---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------DNA定量方法http://www.bioon.com/bbs/post/view?bid=67&id=545030&sty=1&tpg=6&age=0http://www.bioon.com/bbs/post/view?bid ...
