【共享】最新细胞影像学分析技术——SNAP-Tag

New England Biolabs（NEB 公司）隆重推出蛋白质标记 SNAP-tag 最新技术，该项技术可以在活细胞及固定细胞中研究蛋白质的功能和定位。SNAP-tag 技术能将哺乳动物细胞体内蛋白质成像并且体外捕获蛋白质，为研究蛋白质提供了强有力的工具。

其工作原理是：构建基因，表达融合蛋白质，再与多种荧光基团、生物素或磁珠形成共价结合。为了使用方便，NEB 提供两套系统：一套是标记物可以直接自我标记构建好的融合蛋白质（SNAP-tag 和 CLIP-tag），另一套是标记物通过酶促标记蛋白质（ACPtag和MCP-tag）。

融合 Tag 技术：
SNAP-tag 和 CLIP-tag
SNAP-tag 和 CLIP-tag 技术能将目标蛋白以共价键的形式，特异性地标记上任何分子。
SNAP-tag 来自人烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移酶(O6-alkylguanine-DNA-alkyltransferase，hAGT)，该酶是一种DNA修复蛋白，它的底物是一类苄基嘌呤和嘧啶的衍生物，包括苄基鸟嘌呤
（Benzylguanine，图 1）。标记反应时，底物的苄基部份被替换，与 SNAP-tag 形成共价键。
使用该系统时应包括两个步骤：亚克隆目标蛋白质，使其与 SNAP-tag 形成融合表达蛋白
（fusion protein）；选择理想底物标记 SNAP-tag。CLIP-tag 是由 SNAP-tag 衍生而来，经过基因改造，使其不与苄基鸟嘌呤衍生物结合，而与苄基胞嘧啶衍生物（Benzylcytosine）结合。与SNAP-tag 联合使用时，CLIP-tag 能够同时标记同一个细胞中两个不同蛋白质。[/u]

图 1：SNAP-tag（金色）或 CLIP-tag（紫色）与目标蛋白融合表达后，与标记物 X 发生自我标记，附属产物是鸟嘌呤或胞嘧啶。

特点：
● 方便 - 单次克隆表达后，可标记不同底物
● 快速 - 标记方法简便
● 特异性高 - 无需纯化，背景低
● 准确 - 标记反应是在生理条件下形成特定位点的共价键
● 无毒 - 底物对活细胞无毒性
● 直接共价键标记 - 不需抗体和反复清洗
● 选择范围广 - 大量不同且已为不同成像仪优化的底物可供选择