临床研究者通常都很关注高浓度血浆儿茶酚胺及其O-甲基化代谢产物(变肾上腺素)的测定。但是，这些化合物(尤其是去甲肾上腺素、肾上腺素和多巴胺)由于极性较大，利用反相LC-MS/MS对其进行分析是一项巨大挑战。因此，许多研究实验室仍采用离子对试剂与电化学检测(ECD)分析这类物质。虽然反相LC-MS/MS已得到成功应用，但由于基质组分发生离子抑制、保留不够和异丙肾上腺素与肾上腺素未基线分离，致使挑战仍然存在。
细胞治疗是将人体细胞经体外培养、诱导增殖活化后回输入人体的一种治疗肿瘤等疾病的方法，因安全有效，并能提高生活质量而广为人们所关注和采用。细胞治疗离不开细胞培养，而培养过程中细胞因子或活性蛋白的加入不可或缺，这些细胞因子或活性蛋白目前基本上都是重组表达而来。对于原核细胞表达，培养时需在培养基中加入蛋白胨。而真核细胞表达时，则需在培养液中加入牛血清。蛋白胨和牛血清都是动物成分，因此用传统表达法表达出来的细胞因子或 ...
iTRAQ技术iTRAQ技术是由美国应用生物系统公司(Applied Biosystems Incorporation，ABI)2004年开发的同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ)技术，是一种新的、功能强大的可同时对四种样品进行绝对和相对定量研究的方法，这种方法是建立在iTRAQ试剂的基础上。iTRAQ技术原理：iTRAQ试剂为可与 ...
3D（三维）细胞培养使细胞聚集生长，形成组织样结构，更好的模拟体内生理状况。瑞士insphero公司的3D细胞培养技术无需使用支架介质，通过悬滴法给细胞提供一个更加接近体内生存条件的微环境，使细胞形成3D微组织，从而更好地模拟体内细胞生长情况，更直观的反映细胞生物学和功能，更准确的构建靶组织模型。InSphero公司的3D细胞悬滴培养板使用的是GravityPLUS™自动悬滴板，使用这一平台将自己的细胞培养成 ...
临床研究者通常都很关注高浓度尿液中的儿茶酚胺及其O-甲基化代谢产物(变肾上腺素)的测定。但是，这些化合物(尤其是上腺素、肾上腺素和多巴胺）由于极性较大，利用反相LC-MS/MS对其进行分析是一项巨大挑战。因此，许多研究实验室仍采用离子对试剂与电化学检测(ECD)分析这类物质。虽然反相LC-MS/MS已得到成功应用，但由于尿液基质组分发生离子抑制、保留作用不足和异丙肾上腺素与肾上腺素未完全分离，致使挑战仍然存在。
不同助表面活性剂对o/w型微乳形成的影响 目前在药物活性筛选与研发过程中，生物药剂学分类为Ⅱ或Ⅳ类的化合物日益增多。由于这些化合物溶解度低，因此，寻找合适的处方与工艺以提高其生物利用度是一直以来的目标。o/w型微乳体系中纯在大量表面活性剂，可增加某些水难溶性药物的溶解度，利于药物在体内的吸收，从而提高生物利用度。国内关于微乳处方的研究多以对不同表面活性剂的评价为主，对助表面活性剂选择的研究甚少。实际上，助表面活性剂对 ...
研究信号通路时，特别是对于高通量样本检测，通过传统的WB方法来检测蛋白是一项非常费时费力的工作。为了解决这个问题，科学家开始尝试一种新的方法，希望更加高效，简单，没有任何辐射的来检测这些蛋白，尤其是信号传导研究中的磷酸化蛋白。Cell Based Elisa 提供了这样一种理想的，高效的，直接的检测大量样本的细胞信号通路蛋白的方法。我们通过了解Cell Based Elisa 的实验步骤来解析怎样检测高通量的样本中的蛋白，尤其是信号 ...
上海大学生命科学学院、上海市能源作物育种及应用重点实验室的研究人员证实，玉米Pro1基因(Zm P5CS2)的突变造成了突变体细胞中脯氨酸(proline)合成受阻，从而导致proline积累的减少。突变体中proline的缺乏引起了相应的转运RNA(tRNApro AGG)空载形式(uncharged tRNApro AGG)的增多，从而激活了细胞中的GCN2激酶，该激酶通过磷酸化真核生物翻译起始因子eIF2α从而抑制了细胞 ...
华中科技大学同济医学院泌尿外科研究所的研究人员证实，在一水草酸钙刺激肾近端小管细胞后，miRNA的表达谱发生了变化，这将暗示着miRNA也许在结石形成中发挥作用。背景介绍结石形成的原因至今尚未探知，而一水草酸钙（COM）是结石中主要成分，本文通过COM刺激HK-2细胞后的miRNA表达谱的变化，初步探讨miRNA在刺激过程中的作用。文章亮点通过LDH和DAPI染色方法测定最适宜浓度，通过miRNA和mRNA芯 ...
最新一期国际顶级学术期刊《Cancer Cell》杂志以论著形式发表了第二军医大学医学遗传学教研室的研究人员在肝癌转移方面的研究论文，报道了该课题组发现一种表达于人肝癌细胞中的长链非编码RNA（lncRNA），通过直接结合其他RNA分子，调控肿瘤微环境，促进肝癌的早期侵袭及晚期定植。第二军医大学医学遗传学教研室的袁继行博士和孙树汉教授分别是本文的第一作者和通讯作者。背景介绍肝癌是世界上最常见的一种侵袭性人类恶性 ...
植物组织培养基包括多种成分：无机盐、维生素、氨基酸、生长调节剂、糖类、琼脂（或结冷胶）和水。所有这些成分在植物组织培养中至少有1种或多种作用。植物组织培养基中的矿质元素进入植物细胞后用于合成有机分子或作为酶反应中的催化剂。可溶性盐离子在植物电离分子运输中作为平衡离子，渗透压的调节以及维持植物体电化学势的平衡都起着重要的作用。氮、硫和磷是蛋白质和核酸的组成成分。镁离子和许多的微量元素是许多酶和细胞器的基本组成部分， ...
RNA纯化和分析:起始RNA样品的质量是成功实验的最重要的因素之一。我强烈推荐使用QIAGEN的RNA纯化试剂盒来进行RNA纯化。RNA样品必须进行柱上DNase处理，以保证你的RNA的纯度。假如你的样品很特别，需要选择一个最合适的试剂盒进行纯化，请致电或e-mail联系QIAGEN技术人员，他们很乐意帮您选择一个合适的试剂盒。确保RNA样品适合进行PCR array。RNA样品进行PCR array实验前必须先通 ...
样品中RNA的纯度及整体质量对于后续的实验有重要的影响。以下是进行PCR array前RNA质控的推荐标准：定量：NanoDrop/Spectrophotometer（用于检测样本中的核酸浓度，蛋白与核酸的比例及是否存在污染，例如有机物/盐离子等污染）。请记录样品的浓度，230，260及280的吸光值。此方法无法评估RNA的完整性。● 浓度：最佳浓度是100-150ng/uL。如果低于此浓度，可以使用PreAMP system或 ...
Mark Ritchie，Mainak Mal和Stephen Wong沃特世公司，新加坡简介多数“组学”研究的共同目标是鉴定疾病分子标记物、理解疾病作用机理，进而发现潜在的药物靶点。通常情况下，用于研究的体液因为与活体器官和组织密切接触所以其对身体病理状态特定反应非常灵敏。在脂质组学分析中，通常采用液液提取的方式对血浆的磷脂进行研究。过去也曾有固相萃取的应用。氨丙基硅胶柱也可用于分析脂质，但多着重于脂肪酸，或是会根据洗脱 ...
实时定量PCR (qPCR)的优势· 实时检测PCR反应过程· 精确计算出每个循环的PCR产物量· 扩增和检测同时进行· 消除后续PCR的干扰在实时定量PCR反应中，杂交探针与插入染料如SYBR Green相比是更好的选择。荧光标记探针可以提高实时定量PCR结果的效率、灵敏度和特异性。而且定量PCR可以在一个反应里同时检测多个目标基因。实时定量PCR的应用· 基因表达分析· 转基因检测和定量· 病原体检测和定量· 基因型/ SNP分析· 突变检测多重PCR分析 ...
琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的标准方法。该技术操作简便快速，可以分辨用其它方法（如密度梯度离心法）所无法分离的DNA片段。当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶EB（德元国际Cat# LY5009）染色,在紫外光下至少可以检出1-10ng的DNA条带,从而可以确定DNA片段在凝胶中的位置。此外,还可以从电泳后的凝胶中回收特定的DNA条带,用于以后的克隆操作。琼脂糖凝胶分离DNA片度大小范围较广,不同浓度琼脂糖凝 ...
常用的高通量基因和蛋白检测方法包括表达谱芯片、microRNA芯片、二代测序、蛋白质谱及代谢组学分析（2-D、MALDI-TOF-MS、iTRAQ），充分利用这些方法和工具能够起到事半功倍的效果，加速研究进程。仪方生物会陆续推出一系列关于上述技术的案例介绍说明，希望能够为对高通量技术感兴趣的研究者提供有益的帮助，了解技术进展和具体应用，从而掌握相关的技术思路和方法。miRNA（microRNA）表达谱芯片应用案例和 ...
操作步骤（Roche公司）1.用二甲苯浸洗2次，每次5min；2.用梯度乙醇（100、95、90、80、70％）各浸洗1次，每次3min；3.PBS漂洗2次；4.用ProteinaseK工作液处理组织15-30min在21–37°C或者加细胞通透液8min；5.PBS漂洗2次；6.制备TUNEL反应混合液，处理组用50μlTdT＋450μl荧光素标记的dUTP液混匀；而阴性对照组仅加50μl荧光素标记的dUTP液，阳性对照组 ...
王志英沃特世科技(上海)有限公司前言莫西沙星(Moxifloxacin)为人工合成的喹诺酮类抗菌药，是一类较新的合成抗菌药。具有抗菌性强、抗菌谱广、不易产生耐药性，并对常见耐药菌有效、半 衰 期 长、不良 反 应 少 等 优 点。临 床 上 用 于 治 疗 呼 吸 系 统 感 染 、生 殖系统感染、皮肤软组织感染等。莫西沙星原研厂家为德国拜耳，其注射剂在中国的专利保护期即将到期，国内也有多个厂家正在进行莫西沙星的仿制。但如今基于药品安全的考虑，仿制药中的有关物质的检测越发引起注意，中国药典上也明确规定，药物 ...
做过病理实验的人都知道，实验看似容易，但真想把它做好，还是需要花上很长一段时间去积累和摸索经验。我从事病理实验已有 6 年多了，在这段时间里，我做过许许多多病理相关实验，刚开始啥也不懂，一味按照网上操作流程来做，但做的结果往往并不是十分理想，最终结果未能达到预期的效果。经过一段时间的浏览和学习，在论坛内学习、请教，并结合实践操作，我经历了初级——查找资料和摸索方法；中级——问题求助和不断总结；高级——难题解答和经验分享这三个阶段 ...
