PCR -SSCP技术－哈尔滨医科大学 实验原理 聚合酶链式反应-单链构象多态（Polymerase Chain Reaction-Single Strand Conformation Polymorphism，PCR -SSCP）技术是在PCR 技术基础上发展起来的，它是一种简单、快速、经济的用来显示在PCR 反应产物中单碱基突变（点突变）的手段。该方法已被用做癌基因和抑癌基因突变的筛查检测，遗传病的致病基因分析和基因诊断，基因制图等领域。 在SSCP测定中，双链DNA（dsDNA）被变性成为单链DNA（ssDNA），每一条单链DNA都基于它们的内部序列而呈现出一种独有的折叠构象，即使同样长度的DNA单链因其碱基顺序不同、甚至单个碱基的不同会形成不同的构象。这些单链DNA在非变性条件下，用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，单链DNA的迁移率和带型，都取决于其折叠构象和电泳时的温度。 试剂与材料 1．样本DNA（100 ng/ml）、MTHFR上下游引物（5 pmo

Differential Display Technique and Its Application-差异显示技术(DD-PCR )及其应用 高等植物在其生命活动过程中，由于基因的选择性表达，决定了高等植物生命活动的多样性和连续性。在植物的生长、发育、衰老和死亡过程中，都有不同的基因起作用。因此，研究基因的选择性表达，掌握其对植物生命活动的调控，克隆">克隆新基因，是分子生物学的重要课题。 　　1992年，Liang和Pardee［1］ 首次提出差异显示技术(DD-PCR )，并且利用这一技术克隆">克隆了几个基因。由于该技术具有快速、灵敏、简单和可分析低丰度mRMA的优点［2］ ，很快成为克隆">克隆新基因和研究植物基因表达的有力工具。这项技术最初用于医学研究上，近年来已开始在高等植物研究中应用，为研究高等植物的发育、生理代谢、基因表达提供了重要的技术手段。 1　差异显示技术的原理和实验程序 　　差异显示的基本原理是，利用一系列的oligo(dT)引物，逆转录真核生物细胞中全部表达的mRMA，通过PCR 扩增的

SNPs概念 (single nucleotide polymorphism ， SNP ，发音为 “snips”), 主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的 DNA 序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种。占所有已知多态性的 90% 以上。 SNP 在人类基因组中广泛存在，平均每 500 ～ 1000 个碱基对中就有 1 个，估计其总数可达 300 万个甚至更多。 SNP 所表现的多态性只涉及到单个碱基的变异，这种变异可由单个碱基的转换 (transition) 或颠换 (transversion) 所引起，也可由碱基的插入或缺失所致。但通常所说的 SNP 并不包括后两种情况。 理论上讲， SNP 既可能是二等位多态性，也可能是 3 个或 4 个等位多态性，但实际上，后两者非常少见，几乎可以忽略。因此，通常所说的 SNP 都是二等位多态性的。这种变异可能是转换 (C T ，在其互补链上则为 G A) ，也可能是颠换 (C A ， G T

SNP 研究相关概述 SNPs是指DNA序列上发生的单个核苷酸碱基之间的变异,在人群中这种变异的发生频率至少大于1%, 它是基因组中存在的一种数量非常丰富的变异形式,占人类基因组中遗传多态性的90％以上。针对不同人种基因组的测序结果表明,在人类群体中存在大约1000万个SNP位点,在公共数据库中至少有500多万个SNPs已被报道,SNPs在基因组的分布密度达到每300-500个碱基就存在一个SNP。 1. SNPs检测技术的进展 随着分子生物学技术的飞跃发展, SNPs基因分型技术和方法不断涌现。虽然经典的一些检测SNPs的技术,如限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism, RFLP）和单链构象多态性（single-strand conformation polymorphism, SSCP）等技术仍在实践中广泛使用,但一些高灵敏度、高通量的基因分型方法日益受到重视,这些检测技术包括：TaqMan探针法、SNPlex基因分型法、连接酶检测反应法（

一．Pyrosequencing技术用于炭疽热细菌的鉴定： 以下方案指出了以前用于炭疽热细菌鉴定方案的局限性，这些方案有抗体检测的诊断方法， 16S rRNA基因的序列分析， DNA杂交， gamma phage sensitivity tests和carbohydrate profiles等。该方案肯定了利用pyrosequencing鉴定细菌的优势。 鉴定炭疽热细菌Bacillus anthracis的最新方案 利用PSQ 96 DNA分析系统，基于DNA序列测定的炭疽热细菌的菌种鉴定 及其致病力鉴定 土壤细菌Bacillus anthracis (B.anthracis)是引起炭疽热严重感染的病原细菌。从接触病原体到症状最初出现的感染发展过程一般为1到6天。如果确认受到B.anthracis攻击，利用抗生素或解毒剂可以防治其感染，因此快速鉴定病原微生物种类和其致病力状态具有很重要的意义。在接触病原体的起初24-48小

二、脂质体介导DNA转染法 脂质体(lipofectin re geant,LR)试剂是阳离子脂质体N-[1-2，3-Dioleyoxy, Propyl]-n, n,n-Trimethylammonium Chloride(DOTMA)和Dioleoyl photidye-thanolamine(DOPE)的混合物[1:1(w/w)]。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方便的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5～100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。 用LR进行转染时，首先需优化转染条件，应找出该批LR对转染某一特定细胞适合的用量. 作用时间等，对每批LR都要做：第一，先要固定一个DNA的量和DNA/LR混合物与细胞相互作用的时间，DNA可从1～5 μg和孵育时间6小时开始，按这两个参数绘出相应LR需用量的曲线，再选用LR和DNA两者最佳的剂量，确定出转染时间(2～24小时)。因LR对细胞有一定的毒性，转染时间以不超过24小时为宜。 细胞种类：COS-7. BHK. NIH3T3. Hela和Jur

相关专题 目的： 展示GlycoWorksTM 工作流程的各方面优势，包括在方法验证和故障排除中适用于不同SPE型式的灵活性以及所采用的人IgG对照标准品的可行性。 背景： 蛋白质 的糖基化反应是十分有意义的翻译后修饰，可以调节蛋白质的结构 和功能。生物治疗药物的糖基化作用无疑是必须进行彻底表征与监测的结构特征，尤其是在多聚糖图谱的变化与疗效和/或免疫原性的变化相关时。 一套用于评价糖蛋白 中N-糖的常规应用方法包括：通过PNGase F释放出多聚糖，采用具有荧光活性的2-氨基苯甲酰胺(2-AB)进行标记，然后采用亲水作用色谱法(HILIC)进行分离，最后由荧光检测器(FLR)进行检测(图1)。此工作流程中，比较复杂的是样品制备步骤。为使此过程更加直观，沃特世(Waters® )推出了GlycoWorks，将N-糖制备与分析 所需的诸多耗材组合在一起。最值得注意的是，GlycoWorks实现了HILIC SPE的前/后标记纯化步骤，这对于确保方法的稳定性而言非常重要。 GlycoWorks可帮助制备出

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一、实验原理 DNA重组技术的第一步是从不同来源的DNA上将待克隆的DNA片段特异性切下，同时在载体DNA分子（一般为质粒DNA）上打开相应的缺口，然后将两者连接成重组DNA分子。这一特异性的切割过程常由特定的限制性核酸内切酶来完成。 目前在细菌中发现有600多种限制性核酸内切酶，根据其性质的不同可分为三大类，分别为I、II和III类：I类酶识别部位和切点不同，切断部位不定；III类酶的识别部位和切点不同，但切断特定部位；II类酶切断识别部位或其附近的特定部位，酶切后的双链DNA的末端是粘性末端，某些限制酶产生平末端。因此，应用于基因工程研究用的限制酶，一般全是II类酶，现在市场上销售的酶都属于II类酶。 二、实验 试剂 DNA样品（基因组和胆盐水解酶基因连接T载体的重组质粒）， 限制性内切酶 ，酶切缓冲液（购酶时附），无菌双蒸水。 ask.bbioo.com 单酶切质粒和基因组体系 酶切体

琼脂糖凝胶电泳检测 DNA 实验目的 本实验旨在学习水平式琼脂糖凝胶电泳，检测DNA含量与分子量。 实验原理 根据DNA分子量不同，采用外加电场使其分开，用EB嵌入DNA分子后在紫外下显色。 琼脂糖凝胶电泳是利用琼脂糖溶化再凝固后能形成带有一定孔隙的固体基质的特性。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。 1） 在电场的作用下及中性pH的缓冲条件下，带负电的核酸分子向正极迁移。由于糖一磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正极方向移动。 2） 在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即DNA分子本身的大小和构型。具有不同的相对分子质量和不同构型的DNA片段泳动速度不一样，可进行分离。 3） 溴化乙锭在紫外光照射下能发射荧光，当DNA样品在琼脂糖凝胶中从负极向正极泳动时，溴化乙锭从正极向负极移动，这样溴化乙锭分子就会嵌入DNA分子中形成络合物，使DNA在紫外光下发射很强的荧光。在溴化乙锭足够的情况下，荧光

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目前，电子病历存在一些缺点。例如，需要大量的计算机软硬件投资和人员培训，有些医务人员甚至很难适应计算机操作。计算机一旦发生故障，将造成系统停顿，无法进行工作，因此，经常需要保存手工的原始记录。还有在将病历数据输入计算机时经常会出现各种错误（主要是操作失误），需要严格的检查，以防止发生差错和事故。 易迅电子病历可以有效规范医护人员书写病历的行为，减少因病历原因造成的医患之间的纠纷。优势优点： 1. 传送速度快。医务人员通过计算机网络可以远程存取病人病历，在几分钟甚至几秒钟内就能把数据传往需要的地方。在急诊时，电子病历中的资料可以及时地查出并显示在医师的面前。 2. 共享性好。现在使用的常规病历有很大的封闭性。医院诊治病人的记录只保存在本医院，如果病人到其它医院就诊则需要重新进行检查，这不仅浪费了宝贵的医疗资源也使病人增加了不少不必要的痛苦。而采用电子病历后，则能够克服这些不足。病人在各个医院的诊治结果可以通过医院之间的计算机网络或病人随身携带的健康卡（光卡和IC卡）来传输。病历的共享将给医疗带来极大的方便。 3. 存贮容量大。由于计算机存

随着近十年来政府加大对科研的投入，中国SCI科研论文的发表数量飞速增长，“超英赶美”仿佛即将成为现实。在过去十二年里，中国SCI论文发表量已达102.3万篇,稳居世界第二（美国325.0万篇，德国84.5万篇），被引数亦排全球第六。十几年前，即使在211高校中，能发SCI文章的人数都是寥寥无几，而今各学院中没有发过SCI的人数少之又少。甚至有些省市级科研单位，也有很多科研人员都发了不少SCI论文。然而，在振奋和欣慰之余，也出现了许多负面的现象，那就是屡屡被曝光的学术不端及科研腐败事件。而在这些关于“学术不端”的讨论中，论文编辑公司总会被拿来说事儿，成为被指责的对象。但是，或许由于缺乏对中国论文编辑公司及市场的了解，导致部分指责有失偏颇。 大约十年前，有人独具慧眼进军中国论文编辑市场，当时论文编辑公司是新鲜事物，全国也没有几家。但近年来，因应急剧增长的论文写作与发表需求，各种各类编辑公司如雨后春笋般遍及全国。保守统计，在国内经营的大大小小编辑公司现有近300家，而且仍以每周新增一家的速度发展。这些公司良莠不齐，龙蛇混杂：有些公司为国内科研走向世界做出了很大贡献，成为科研人员

我们在日常看天气预报时，都会留意到有一个舒适度的参数，通常可以告诉我们这些天气人体是否感觉的舒适度如何。那么，这个参数是怎么得来的呢？ 首先，人体是与我们生存的外部环境息息相关的，而且往往是人体对环境的状况进行适应。首要影响的就是环境温度，例如在教科书中提到，人体对温度的适应，就是当炎热时通过毛孔放大、蒸发汗液来使自身的体温保持在36.5 ℃左右，而当环境温度低的时候，人体毛孔会收细，并且通过肌肉颤抖来产生热量，维持体温。除此以外，环境中影响人体的比较重要的参数还有相对湿度、风流动的速度以及环境二氧化碳含量。 所以，现在所有的舒适度评价，虽然各个发布机构的计算公式不尽相同，但是都是以上述四个参数：温度、湿度、二氧化碳及风速通过公式计算而获得舒适度指数来进行评价的。可见，这四个参数是进行舒适度评价的重要因素。 德图testo的多功能测量仪其中一个重要应用就是在可以同时进行舒适度评价里面四个重要参数，并且由于仪器本身具有多功能测量的能力，可以另外接入紊流度探头以及光照度探头，经过这样的组合以后，仪器即具备检测：温度、湿度、CO2浓度、绝对压力、紊流度、光照度6个

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根据《卫生信息化发展规划(2011—2015年)》，卫生信息化是深化医药卫生体制改革的重要内容，也是重要支撑和保障。从2010年卫生信息化建设已经呈现出了快速发展态势，如以电子病历为核心的医院信息系统和以电子健康档案为核心的区域卫生信息平台已经初步建立，而标准化之路依然漫长。 早在2010年全国医院经过政府采购的电子病历建设实施项目，软件实际签约额就已经达到1亿~1.5亿元之间；2011年电子病历软件市场总量则上升至1.5亿~2.5亿元，如今的市场规模虽然在不断扩大，但随之而来的是参与者越来越多，导致竞争日益激烈。 目前国内领先企业如易迅电子病历，由于其研发实力强，专业化程度高，在医院信息化系统研发领域优势明显。 同时分析了我国卫生信息化发展中存在的主要问题，其中信息标准问题被放在突出位置。目前，医疗机构内部的信息化功能强，但医疗机构之间的总体协同效果差;标准化建设薄弱，纵向卫生业务系统的功能强，信息系统之间缺乏信息共享和业务协作机制，系统之间信息不能互通。 为加强信息互联互通，减少“孤岛”现象发生，近年来各种行业标准不断推出，但标准落地仍然

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每个期刊的Guidelines 都各有不同，有些要求非常详尽，但有些却相对简单，在这种情况下，作者也许会产生疑问和困惑，在没有提及要求的部分，论文格式该如何修改呢？以下表格是关于论文格式修改的通用APA模式。这是许多期刊的通用格式，尤其在某些期刊要求不明晰的情况下，可参考以下格式对论文进行修改，以确保论文在格式上的统一，以便期刊进行审阅。 纸张大小 标准的8.5英寸x11英寸纸张大小 页边距 上下左右页边距都为1寸 英 字体 12号字体大小。Times Roman，但是图片使用无衬线字体，如Arial 行距 两倍行距 对齐方式 左对齐（右边距不相等） 段落缩进 5 - 7个空格 句末 句号后一个空格 页码 标题页开始，除图片页外每一页的右上角，离顶部0.5英寸处标上页码，右对齐。 标题页 标题页通常是第一页。在页码下一行，副标题左对齐，副标题要全部大写。 在副标题下，使用大写和小写表示以下内容，居中对齐： 文章标题 你的名字 你所属的机构信息

背景： 在生产与医疗健康有关的产品的工厂中，为了要保证产品质量、安全和无菌包装的需要，进行环境温湿度的监测是具有决定性的举措。环境监测系统提供在线的数据以及分析报告，使客户可以对环境的测量进行预估和控制，在有需要的情况下执行预防和修正。 关于客户： 图1：PROESCA, C.A.注射器工厂 PROESCA是Pequiven的一家子公司，建立于2008年，致力于推广、支持和发展聚合物、发酵产品及化学品事业，兼顾与环境及周边事物融洽的可持续发展计划。注射器工厂位于委内瑞拉Ana Maria Campos (CIAMCA)的工业区，工厂为委内瑞拉公众安全研究院生产注射器。目前注射器产能为14.4亿支/年。 主要挑战： PROESCA注射器生产基地要求温湿度监控系统可以符合以下的参数要求： 温度：10至40 ℃，精度要求± 0.5 ℃ 相对湿度：10至90%RH，精度要求± 5% 差压：-60至60帕斯卡，精度要求± 2.5帕斯卡 环氧乙烷：0到2 ppm，精度要求± 0.1 ppm 另外，系统