Visium空间基因表达解决方案-冰冻切片制备指南
上海仁科生物科技有限公司
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上一期，我们为大家介绍了—Visium 空间基因表达解决方案-样本冰冻包埋指南，本期我们将为大家介绍冰冻切片制备指南！满满的干货，记得收藏哦！
首先，为大家推荐一款用于Visium空间基因表达解决方案的冰冻切片机——Leica CM1950! 其电动切片、步进马达确保冷冻切片的厚度、质量及切片间一致性；精细的定位控制可以满足对细微组织的精密切割；强大的制冷系统为切片温度提供了有力保障！
在基于配备了CM1950冰冻切片机的条件下，在切片之前，我们需要考虑的主要问题有以下三个：
1，冰冻切片面积的大小：因为芯片捕获区域的面积为6.5mm X 6.5mm，所以我们要控制切割区域在这个面积以内；
2，冰冻切片的厚度：冰冻切片的厚度一般设置在10μm，但是根据不同的组织类型，切片厚度也会有所调整。例如脂肪含量较高的乳腺组织可能需要更厚的切片；
3，冰冻切片质量：由于不同的组织样本中脂质、蛋白质含量有所差异，冷冻组织的硬度和延展性并不相同，因此切片的环境温度也有所要求。温度过低，会导致组织块过硬，切片出现碎裂、薄厚不均或孔洞；而温度过高，导致组织变软，硬度不够，切片无法成形或者出现褶皱。
首先，为大家推荐一款用于Visium空间基因表达解决方案的冰冻切片机——Leica CM1950! 其电动切片、步进马达确保冷冻切片的厚度、质量及切片间一致性；精细的定位控制可以满足对细微组织的精密切割；强大的制冷系统为切片温度提供了有力保障！
1，冰冻切片面积的大小：因为芯片捕获区域的面积为6.5mm X 6.5mm，所以我们要控制切割区域在这个面积以内；
2，冰冻切片的厚度：冰冻切片的厚度一般设置在10μm，但是根据不同的组织类型，切片厚度也会有所调整。例如脂肪含量较高的乳腺组织可能需要更厚的切片；
3，冰冻切片质量：由于不同的组织样本中脂质、蛋白质含量有所差异，冷冻组织的硬度和延展性并不相同，因此切片的环境温度也有所要求。温度过低，会导致组织块过硬，切片出现碎裂、薄厚不均或孔洞；而温度过高，导致组织变软，硬度不够，切片无法成形或者出现褶皱。
冰冻切片前实验准备
2.使用冰冻切片去除多余的OCT：
a.一旦冷冻，将组织块安装在低温恒温器的卡碟处，开始切片以去除多余的OCT。
b.切片情况在不同的组织和低温恒温器中有所不同。按照制造商的建议进行冷冻切片
c.继续切片，直到组织可见。
3.组织区域的切割选取：
大的组织样本可以在切片时进行切割选取，以生成更小的样本以适应捕获区域。用预冷刀片在组织的切割面做一个浅切口(约1毫米深)。切口要浅。深切口可能导致组织损伤和解体。例如:要检查小鼠大脑一个半球内的特定区域，可以在大脑中线处做一个约1毫米的浅切口。
b.一旦获得所需的组织切片，用低温恒温刷轻轻接触周围的OCT，小心地将其展平。
c.将切片置于预平衡的Visium玻片上的捕获区域内，方法是将切片与玻片的表面轻轻接触。
注意：不要把组织切片放在室温的玻片上。玻片应平衡到低温恒温室的温度。避免载玻片的活性表面与低温箱接触，因为这会破坏寡核苷酸并降低Visium玻片的捕获效率。
d.立即将手指放在玻片的背面几秒钟，让切片与玻片粘在一起。
注意：确保整个组织切片完全附着于载玻片上，在整个切片放置过程中玻片放置于低温恒温器腔内。切片和组织放置过程中，任何时候都不要将切片从低温恒温箱中取出。
e.立即将带组织切片的载玻片置于低温恒温箱上冷冻。继续转移剩余捕获区域的部分。
注意：在Visium组织优化玻片中，在8个捕获区域中的7个区域放置切片，留下一个空白区域用于RNA阳性对照。
f.将含有组织切片的载玻片转移放置在干冰中的载玻片容器中。
g.将玻片以-80℃保存一周或立即使用Visium说明书进行后续操作。
注意：在密封的容器中单独存放含有组织的玻片(每个容器存放一个)。如有必要，可将载玻片放入二级容器中，如可重复密封的袋子。
其他注意事项
1.将OCT包埋的的组织块放入标本台：
a.用OCT填充样品碟。
a.用OCT填充样品碟。
b.将OCT包埋的组织块置于台面，切面朝向台外
c.将样品碟和组织块放置在低温恒温室内的低温恒温器上
d.让OCT和组织块冻结并粘附在标本台上
c.将样品碟和组织块放置在低温恒温室内的低温恒温器上
d.让OCT和组织块冻结并粘附在标本台上
2.使用冰冻切片去除多余的OCT：
a.一旦冷冻，将组织块安装在低温恒温器的卡碟处，开始切片以去除多余的OCT。
b.切片情况在不同的组织和低温恒温器中有所不同。按照制造商的建议进行冷冻切片
c.继续切片，直到组织可见。
3.组织区域的切割选取：
大的组织样本可以在切片时进行切割选取，以生成更小的样本以适应捕获区域。用预冷刀片在组织的切割面做一个浅切口(约1毫米深)。切口要浅。深切口可能导致组织损伤和解体。例如:要检查小鼠大脑一个半球内的特定区域，可以在大脑中线处做一个约1毫米的浅切口。
冰冻切片及切片在玻片上的加载
当我们根据实验目的设置好切片面积，厚度，温度后，得到的切片需要放置在Visium捕获芯片上，所以，我们在正式实验之前，需要在普通玻片上进行练习。
a.在普通玻璃片上练习放置。Visium玻片捕获区域布局如下图。
a.在普通玻璃片上练习放置。Visium玻片捕获区域布局如下图。
b.一旦获得所需的组织切片，用低温恒温刷轻轻接触周围的OCT，小心地将其展平。
c.将切片置于预平衡的Visium玻片上的捕获区域内，方法是将切片与玻片的表面轻轻接触。
注意：不要把组织切片放在室温的玻片上。玻片应平衡到低温恒温室的温度。避免载玻片的活性表面与低温箱接触，因为这会破坏寡核苷酸并降低Visium玻片的捕获效率。
d.立即将手指放在玻片的背面几秒钟，让切片与玻片粘在一起。
注意：确保整个组织切片完全附着于载玻片上，在整个切片放置过程中玻片放置于低温恒温器腔内。切片和组织放置过程中，任何时候都不要将切片从低温恒温箱中取出。
e.立即将带组织切片的载玻片置于低温恒温箱上冷冻。继续转移剩余捕获区域的部分。
注意：在Visium组织优化玻片中，在8个捕获区域中的7个区域放置切片，留下一个空白区域用于RNA阳性对照。
f.将含有组织切片的载玻片转移放置在干冰中的载玻片容器中。
g.将玻片以-80℃保存一周或立即使用Visium说明书进行后续操作。
注意：在密封的容器中单独存放含有组织的玻片(每个容器存放一个)。如有必要，可将载玻片放入二级容器中，如可重复密封的袋子。
其他注意事项
