材料与仪器
蛋白类型:
(Alpha, Beta, Gamma)
单体, 寡聚体, 纤丝, 和原纤维
步骤
储存条件:
单体, 寡聚体, 和未经超声处理的原纤维和纤丝: -80ºC; 保质期一年以上
超声处理过的原纤维: -80ºC; 8 周
冻融循环:
最多 2 次冻融循环
解冻条件:
原纤维, 寡聚体, 和纤丝: 37ºC
单体: 置于冰上或 4ºC
储存条件 (解冻的蛋白):
原纤维, 寡聚体, 和纤丝: 室温. 不要将原纤维保存在冰上或者 4ºC; 原纤维和纤丝在 4ºC 下不稳定并会很快降解. 原纤维, 寡聚体, 和纤丝在室温下稳定,在准备实验时可以放在试验台上。
单体: 置于冰上或 4ºC. 如果将单体置于室温或者 37ºC 下时间过长可能会开始聚集。
混合/移液:
原纤维处于悬浮状态,应在使用前短暂涡旋并上下移液以确保均匀性。
单体和寡聚体在溶液中,解冻后应上下移液以确保均匀性。
纤丝是可溶性和不溶性物质的混合体,应在使用前短暂涡旋并上下移液以确保均匀性。
超声处理:
为达到最好效果, 原纤维和纤丝应在使用前立即进行超声处理。超声前后也需要混合/移液以确保均匀性。单体和寡聚体不需要超声处理。
操作安全:
适当的实验室服装:手套、面罩和护目镜,需要用于所有涉及原纤维的工作,尤其是在可能产生气溶胶的地方(例如在探头超声处理过程中)。用以下溶液清洁任何溢出物 10% 漂白剂或 10% SDS 水溶液。
来源:丁香实验