Tau 蛋白硫磺素T检测操作步骤

材料：硫黄素 T、PBS、蒸馏水、肝素、0.2μm 注射器过滤器、96 多孔孔板

仪器：移液器、全波长荧光型酶标仪、震荡孵育器

1.在蒸馏水中制备 1mM 的硫黄素 T 储备液 (需是新鲜制备并用 2µm 注射式过滤器过滤)。

2.然后用 PBS pH7.4 将每个孔中的硫黄素 T 储备液稀释至最终浓度为 25µM (每孔容量 = 100µL)。

3.向每个孔中加入 10uM 肝素。

4.将分装小份的 tau 蛋白在使用前于 37℃ 下进行解冻。

5.将原纤维或单体 (或两者都有) 加入到合适的实验孔中. 用移液器上下吸放混合孔中物质。

6.将孔板密封并放置于震荡孵育器上(800rpm)，温度为 37℃。

7.用全波长荧光型酶标仪读取荧光读数。

8.再次将孔板密封放置于震荡孵育器上, 温度为 37°C。

9.在 1 到 72 小时之间的固定间隔读数。

酶标仪参数设置:

温度: 37°C

读取形式: 孔板扫描

波长: 激发光 450nm，发射光 485nm

PMT 增益: 自动

闪光每读: 6

震荡: 读数前 20 秒