细胞实验

下述的通用操作方案适用于小鼠、大鼠、仓鼠和鸡胚胎。选择大约一半足孕时间的胚胎最好，10~13 天龄胚胎含有最大数量的未分化的间质细胞，成纤维细胞可从这些细胞衍生获得。本实验来源于细胞实验指南（上册)，作者：黄培堂。

检测支原体有两种不同的策略：第一种方法将在下述方案中述及，利用对 DNA 染色的荧光染料 Hoechst 33258, 它对细胞核周围（在细胞表面或胞质中）的特殊物质进行染色，可显示支原体污染；第二种方法是利用 DNA 探针识别细胞提取物中的 DNA 支原体特异序列，进行支原体污染的检测。本实验来源于细胞实验指南（上册)，作者：黄培堂。

冻存细胞的复苏可以用于：（1）在细胞的实验操作中，冻存的细胞要进行复苏，再培养传代。（2）持久地保留细胞系

各种细胞操作，包括传代、冻存和原代组织的分离，均能导致细胞死亡。为了确定群体细胞中的存活细胞数，可采用台盼蓝染料排斥实验（Phillips 1973)。本实验来源于细胞实验指南（上册)，作者：黄培堂。

通过血细胞计数分析可以用于：（1）了解患者血液的基本信息；（2）了解患者有无感染、有无贫血、是否有凝血功能障碍等。一般是必做的检查。

下述方案描述的是釆用胰蛋白酶处理细胞，进行细胞的传代或收集。维持细胞系的方法通常为每周传代一次，在传代的前一天换培养液；但是某些细胞系需要更频繁的传代。每种细胞系应单独传代以免细胞系交叉污染。超净工作台内不能同时放置个以上细胞系。本实验来源于细胞实验指南（上册)，作者：黄培堂。

不同批次的血清支持细胞生长的能力也不同，尤其是对克隆细胞的生长。检测不同批次的血淸，然后大批量购买血清不仅能节约经费且能减少实验条件引起的差异，某些批次血清可能含有毒性或抑制生长的化合物。本实验来源于细胞实验指南（上册)，作者：黄培堂。

单层生长的细胞增殖，融合成片，并长满细胞瓶表面。有些细胞靠频繁地换液可维持细胞在平台期数天至数周；而许多其他细胞系需要胰蛋白酶处理、传代培养后才能存活下来，用胰蛋酶处理可将细胞从生长物表面分离下来以促进传代培养。本实验来源于细胞实验指南（上册)，作者：黄培堂。

悬浮细胞在细胞培养瓶中的接种可以用于：（1）细胞的大量培养；（2）给细胞提供适宜的生长环境。本实验来源于细胞实验指南（上册)，作者：黄培堂。

本实验来源于：动物细胞培养--基本技术指南（第五版）

以高浓度接种细胞和微珠，然后按照要求进行稀释、搅拌和取样。

将细胞悬液加入到圆形培养瓶中，然后将培养瓶放在旋转架上缓慢转动。

从妊娠 17 d 或 18 d 的胎鼠取出脑（与地方动物伦理委员会联系），将脑制成单细胞悬液。通过在用琼脂预涂的多孔培养板中培养，使脑细胞形成聚集物。在 20 d 的培养过程中，聚集物中的细胞形成成熟的器官样脑结构。

将细胞接种入滤膜培养皿内，在多孔培养板中以过量的培养液进行培养。

用胰蛋白酶消化 75 cm2 培养瓶中的细胞，计数后与藻酸盐溶液混合。用注射器将藻酸盐细胞悬液滴加入氯化钙溶液，制成微珠，然后悬浮培养。

用胰蛋白酶消化单层细胞或分散原有组织，将细胞接种到涂布琼脂的底物上。将聚集物转移到 24 孔培养板，进行分析。

通常用酶消化腺瘤，用手术刀片将癌组织切碎。如果分化良好的结肠直肠癌标本切开后仍不易分离细胞，可用酶消化方法分离。

用琼脂或甲基纤维素混悬骨髓细胞，然后将细胞接种于培养皿，加入合适的生长因子。

将骨髓吸入培养液。作为附着的多层细胞，骨髓至少维持 12 周，可达 30 周。干细胞、趋向成熟的骨髓细胞和成熟骨髓细胞从附着的细胞层释放入培养液。粒细胞或巨噬细胞的祖细胞可用软凝胶培养检测。

本实验用于成骨细胞的原代培养。