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石蜡包埋组织样本的制备
本实验来源「实用流式细胞术彩色图谱」 王书奎、周振英主编。
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组织活检、内镜取材标本单细胞悬液的制备
本实验来源「实用流式细胞术彩色图谱」 王书奎、周振英主编。
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新鲜实体组织样本的制备(化学处理法)
化学处理法是将组织细胞间起黏着作用的钙、镁离子置换出来,从而使细胞分散开来。本实验来源「实用流式细胞术彩色图谱」 王书奎、周振英主编。
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新鲜实体组织样本的制备(机械法)
机械法分散实体组织。用手术剪刀剪碎组织、用锋利的解剖刀剁碎组织或用匀浆器制成组织匀浆,再用细注射针头抽吸细胞或用 300 日尼龙网滤出单细胞悬液;采用网搓法也能获得大量细胞。机械法易造成细胞碎片和细胞团块,所以常与其他方法配合使用。本实验来源「实用流式细胞术彩色图谱」 王书奎、周振英主编。
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新鲜实体组织样本的制备(酶消化法)
本实验来源「实用流式细胞术彩色图谱」 王书奎、周振英主编。
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降低上皮细胞培养过程中的污染
上皮细胞易存在纤维细胞污染,其污染程度能够采用特异的中等纤维蛋百亚基波形蛋内(vimentin,作为成纤维细胞的标记)和角蛋白(作为上皮细胞的标记)抗体进行双重免疫荧光染色。关于如何降低污染的方法前面已述及;另一种用来降低贴壁上皮细胞群屮成纤维细胞数量的方法是采用不同浓度的胰蛋白酶化。本实验来源于细胞实验指南(上册),作者:黄培堂。
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牛角质上皮细胞的分离和培养
该方案来 Ehaio 等(1987) 方法,如果组织能得到的话,也可改进后用于其他上皮细胞的分离和培养。从屠宰场获取牛新鲜眼睛,立即置潮湿的冰上。本实验来源于细胞实验指南(上册),作者:黄培堂。
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小鼠角质细胞的分离和培养
该方案根据 Hennings 等(1980) 的力法改进而来。妊娠期 BALB/c 小鼠可从 Harland Sprague Dawley 购得,该方案也适用于原代大鼠角质细胞的分离。
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成纤维细胞的分离
下述的通用操作方案适用于小鼠、大鼠、仓鼠和鸡胚胎。选择大约一半足孕时间的胚胎最好,10~13 天龄胚胎含有最大数量的未分化的间质细胞,成纤维细胞可从这些细胞衍生获得。本实验来源于细胞实验指南(上册),作者:黄培堂。
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荧光显微镜检测支原体
检测支原体有两种不同的策略:第一种方法将在下述方案中述及,利用对 DNA 染色的荧光染料 Hoechst 33258, 它对细胞核周围(在细胞表面或胞质中)的特殊物质进行染色,可显示支原体污染;第二种方法是利用 DNA 探针识别细胞提取物中的 DNA 支原体特异序列,进行支原体污染的检测。本实验来源于细胞实验指南(上册),作者:黄培堂。
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冻存细胞的复苏
冻存细胞的复苏可以用于:(1)在细胞的实验操作中,冻存的细胞要进行复苏,再培养传代。(2)持久地保留细胞系
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活力染色
各种细胞操作,包括传代、冻存和原代组织的分离,均能导致细胞死亡。为了确定群体细胞中的存活细胞数,可采用台盼蓝染料排斥实验(Phillips 1973)。本实验来源于细胞实验指南(上册),作者:黄培堂。
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血细胞计数器计数法
通过血细胞计数分析可以用于:(1)了解患者血液的基本信息;(2)了解患者有无感染、有无贫血、是否有凝血功能障碍等。一般是必做的检查。
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单层细胞的胰蛋白酶处理
下述方案描述的是釆用胰蛋白酶处理细胞,进行细胞的传代或收集。维持细胞系的方法通常为每周传代一次,在传代的前一天换培养液;但是某些细胞系需要更频繁的传代。每种细胞系应单独传代以免细胞系交叉污染。超净工作台内不能同时放置个以上细胞系。本实验来源于细胞实验指南(上册),作者:黄培堂。
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血清检测
不同批次的血清支持细胞生长的能力也不同,尤其是对克隆细胞的生长。检测不同批次的血淸,然后大批量购买血清不仅能节约经费且能减少实验条件引起的差异,某些批次血清可能含有毒性或抑制生长的化合物。本实验来源于细胞实验指南(上册),作者:黄培堂。
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单层细胞在细胞瓶中的接种
单层生长的细胞增殖,融合成片,并长满细胞瓶表面。有些细胞靠频繁地换液可维持细胞在平台期数天至数周;而许多其他细胞系需要胰蛋白酶处理、传代培养后才能存活下来,用胰蛋酶处理可将细胞从生长物表面分离下来以促进传代培养。本实验来源于细胞实验指南(上册),作者:黄培堂。
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悬浮细胞在细胞培养瓶中的接种
悬浮细胞在细胞培养瓶中的接种可以用于:(1)细胞的大量培养;(2)给细胞提供适宜的生长环境。本实验来源于细胞实验指南(上册),作者:黄培堂。
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电穿孔法稳定转染
本实验来源于:动物细胞培养--基本技术指南(第五版)
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微载体
以高浓度接种细胞和微珠,然后按照要求进行稀释、搅拌和取样。
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旋转瓶培养
将细胞悬液加入到圆形培养瓶中,然后将培养瓶放在旋转架上缓慢转动。
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