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限制性内切酶消化 DNA 实验
限制性核酸内切酶消化DNA实验可以用于(1)核酸内切酶大多数来自于细菌体内,与相伴存在的甲基化酶共同构成细菌的限制-修饰体系, 限制外源DNA、保护内源DNA。(2)将酶切后的片段连接到载体上。
实验概况收录 3 操作方法 · 1 相关问答 · 3 相关文章
λ噬菌体DNA限制性内切酶图谱分析
λ噬菌体是分子遗传学研究中常用的生物材料,其DNA的酶切片段常作为测定DNA分子量大小的标准物。限制性内切酶是一类能识别双链DNA分子中特异碱基序列的DNA水解酶,主要存在于原核细胞中。根据这些酶的差别,可分别命名为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型。Ⅰ型和Ⅲ型限制性内切酶在同一蛋白分子中兼有修饰(甲基化)作用及依赖于ATP的限制(切割)活性,但不能在特异序列中降解DNA,因此在它的酶图谱分析与分子克隆中很少应用,主要应用的是Ⅱ型酶,因为这种类型的酶能识别高度特异性的4~6个核苷酸序列,切割后产生5′端突出的互补
实验概况收录 1 操作方法 · 3 相关文章
限制性内切酶法检测 TALEN 活性
TALEN 质粒构建好后,在进行动物或细胞操作前,最好检测其活性,确保 TALEN 的有效性,及减少后续筛选突变体的工作量,TALEN 活性越高,后续的筛选突变体的工作量越少。常用的检测 TALEN 活性的方法有以下 3 种:luciferase SSA 法、非配对内切酶法-T7E1 法和限制性内切酶法。
操作方法所属实验:TALEN 的活性检测
质粒DNA的限制性内切酶酶切分析
实验目的学习和掌握限制性内切酶的特性掌握对重组质粒进行限制性内切酶酶切的原理和方法并理解限制性内切酶是DNA重组技术的关键工具。相关基础知识限制性核酸内切酶:是一类能识别双链DNA分子特异性核酸序列的DNA水解酶。它是基因工程中用于体外剪切基因片段的重要工具酶。上世纪七十年代,当人们在对噬菌体的宿主特异性的限制-修饰现象进行研究时,首次发现了限制性内切酶。首批被发现的限制性内切酶包括来源于大肠杆菌的EcoR I和EcoR II,以及来源于流感嗜血杆菌(Heamophilus
操作方法所属实验:酶切实验
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限制性内切酶综述

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通过PCR扩增在扩增DNA产物末端引入限制性核酸内切酶酶切位点
本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。
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大范围限制性图谱:脉冲电场电泳实验
这一单元介绍了获得基因组DNA(>500kb至>5Mb) 限制性图谱的方法,可用于分析插入大片段的克隆。
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通过PCR扩增在扩增DNA产物末端引入限制性核酸内切酶酶切位点
一、材料1. 缓冲液与溶液氯仿EDTA ( 0.5 mol/L, pH 8.0)乙醇酚:氯仿(1:1,V/V)乙酸钠(3 mol/L, pH 5.2)TE ( pH 7.5)2. 酶与缓冲液噬菌体 T4 DNA 连接酶限制性内切核酸酶3. 凝胶琼脂糖凝胶4. 核酸与寡核苷酸正向引物(20 μmol/L)与反向引物(20 μmol/L)溶于水中靶 DNA5. 载体质粒 DNA 应用相应的限制性内切核酸酶消化和凝胶电泳纯化6. 特殊设备水浴箱二、方法1. 应用本方案的材料部分设计的正向与反向
操作方法所属实验:通过PCR扩增在扩增DNA产物末端引入限制性核酸内切酶酶切位点
MHC限制性确定
Th 细胞表位的 MHC 限制性一般通过测定 MHC II 类分子特异性单克隆抗体对抗原诱导的 T 细胞增殖的抑制来确定,其基本方法与细胞增殖实验相同,并与细胞增殖实验同步进行。
操作方法所属实验:Th细胞表位的鉴定
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常见限制性内切酶识别序列(酶切位点)

常见限制性内切酶识别序列(酶切位点)(BamHI、EcoRI、HindIII、NdeI、XhoI等) 在分子克隆实验中,限制性内切酶是必不可少的工具酶。 无论是构建克隆载体还是表达载体,要根据载体选择合适的内切酶(当然,使用T载就不必考虑了)。先将引物设计好,然后添加酶切识别序列到引物5' 端。常用的内切酶比如BamHI、EcoRI、HindIII、NdeI、XhoI等可能你都已经记住了它们的识别序列,不过为了保险起见,还是得查证一下。 下面是一些常用的II型内切酶的识别

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DNA的限制性内切酶 酶切实验

相关专题 重组DNA技术工具酶 限制性核酸内切酶产品选择专题 实验目的 1. 学会DNA限制性内切酶 酶切技术。 2. 琼脂 糖凝胶电泳法观察酶切DNA的结果。 实验原理 质粒pUC118上有限制性内切酶BamHI的识别序列G↓GATCC,用BamHI酶切后形成线性质粒DNA。琼脂糖凝胶电泳 可以按酶切产物分子量的大小分离DNA片段,小片段比大片段迁移快,凝胶上迁移的距离

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限制性片段长度多态性PCR
限制性片段长度多态性 PCR,是理论依据是首先利用 PCR 扩增目的基因,然后用限制性内切酶酶解样品 DNA,产生大量的限制性酶切片断。将限制性酶切产物进行含有漠化乙锭的琼脂糖凝胶电泳分离,在紫外灯下即可分辨各种限制性片段的大小及其位置。或者将限制性酶切产物与探针杂交进行放射自显影,从而区分各种片段。由于目标 DNA 之间存在有同源性和变异性,当用同一种限制性内切酶酶解不同品种或同一品种的不同个体时,不同酶切产物中就会含有相同或不同的长度片段,从而解读出目标样品之间在 DNA 分子水平的实际
实验概况收录 2 操作方法 · 3 相关文章
位点特异性核酸内切酶的蛋白质工程实验
位点特异核酸内切酶涉及核酸生物化学的许多方面。限制酶及相关酶已成为作用于 DNA 的酶的典范。通过理性蛋白设计,投入了无数的精力试图改变其特异性。本实验来源「现代蛋白质工程实验指南」〔德〕K.M.阿恩特、K.M.米勒编著。
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位点特异性核酸内切酶的蛋白质工程
和相关限制性内切核酸酶的序列。更多的序列从 PSI BLAST 服务器 [ 25 ] 得到。使用 PAM250 矩阵,用 ClustalX 程序比对序列。比对好的序列用 GeneDoc 程序分析 [27] 。程序的使用方法可在程序内使用 “Help” 功能得到。结构的坐标从 PDB 数据库(http :  //www.  rcsb .   org/pdb/ ) 得到。程序 RasWin 和 Swiss  PDB  viewer 用于结构观察。3.1.1 与 DNA 结合有关的保守残基团的辨别在序列
操作方法所属实验:位点特异性核酸内切酶的蛋白质工程实验
构建基因组区域的长距离限制性图谱
操作方法所属实验:大范围限制性图谱:脉冲电场电泳实验
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