限制性内切酶消化 DNA 实验

实验分类：

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

限制性核酸内切酶消化DNA实验可以用于（1）核酸内切酶大多数来自于细菌体内,与相伴存在的甲基化酶共同构成细菌的限制-修饰体系, 限制外源DNA、保护内源DNA。（2）将酶切后的片段连接到载体上。

来源：丁香实验

操作方法

单酶单DNA样品消化

1. 混合下列溶液于一个无菌的微量离心管中（1）x μl DNA（2）2 μl 10×酶切缓冲液（3）18-x μlH2O（4）20 μl 的反应体积可以方便地用于聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶电泳分析。（5）只要反应混合物中其他成分的比例保持一定，可增减待切割DNA的量和反应条件。2. 加入限制性内切酶（1——5 U/μg DNA）在推荐的温度温育1 h （—般是37℃）。3. 理论上，1 U 限制性内

消化多个DNA

1. 分别加入相同体积的各个样品DNA至不同微量离心管中。为避免交叉污染，各样品用不同的吸头。 2. 制备好"预混合液"，它含有足够量的消化所有样品的10x反应缓冲液和水，置于冰浴。 3. 加入足以消化所有样品的酶于"预混合液"的管中，轻弹管壁，混匀，置于冰浴。 4. 取适量上述混合液加入各样品管中，在适当的温度下温育1 h。 5. 终止反应，电泳分析或进一步酶切处理。

部分消化

1. 配制100 ul 含DNA和1x限制酶缓冲液的反应混合物。 2. 将反应混合物加入反应管中，其中管1加30 ul；管2~管4各加20ul；管5加10 ul，置于冰浴。 3. 加入所选用的酶至管1（3~10 U/ug DNA），轻弹管壁混匀，置于冰浴。 4. 使用不同的吸头，从管1中取10 ul 加入到管2，快速混匀，置于冰浴。 5. 依次连续稀释，从管2到管3，管3到管4，管4到