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DNA 的酶切与连接
DNA的连接和酶切可用于：（1）利用限制性核酸内切酶切割DNA和利用DNA连接酶连接DNA是DNA重组过程中的关键步骤之一；（2）成功的酶切和有效的连接为后续的外源基因进入宿主细胞进行表达提供了有效的实验材料。
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用T4 RNA 连接酶连接 RNA 分子
T4RNA 连接酶已经用来生成很多位点特异修饰的 RNA，尤其是寡核苷酸修饰和用反义密码 tRNA 修饰的 RNA。另外，T4RNA 连接酶还可用于 RNA/DNA 分子内/分子间连接、甲链寡脱氧核苷酸的连接、克隆全长 cDNA 及将非天然氨基酸掺入蛋白分子中。
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用T4 RNA 连接酶连接 RNA 分子
一材料与设备1)10XT4RNA 连接酶缓冲液：50 mmol/LTris (pH7,8)，l0 mmol/L MgCl2，5 mmol/LDTT,1 mmol/L ATP2) 无核酸酶的水3)FEG(polyethyleneglycol)40%4)RNA 酶抑制剂5)T4RNA 连接酶6) 供体（donor)RNA7) 受体（acceptor)RNA(二）操作方法1) 进行 RNA 与 RNA 分子连接的反应体系如下：供体 (donor)RNA
操作方法所属实验：用T4 RNA 连接酶连接 RNA 分子
连接介导的单侧PCR
样品中，用移液器轻轻混匀，将样品再置于冰水浴中，样品管加上管扣以防在加热变性时管子爆开。3) 将DNA在95℃变性5 min,引物在60℃复性30 min,然后76℃延伸10 min。正在合成第一链时，可以按步骤4准备溶液。第一链的合成在自动热循环仪上能很容易地自动进行，也可以手工在不同的水浴间转移。为了降低背景，应该使复性温度高于Tm值2℃左右，并且在76℃进行延伸。延伸步骤可以产生一个用于以后连接反应的平端（图15. 3.1)。4) 在冰浴上融化20μmol/L的单侧接头混合物。配制连接
操作方法所属实验：用于基因组测序及足迹分析的连接介导PCR实验
PLA（邻近连接）技术简介
PLA技术全称为Proximity Ligation Assay，国内译为邻位连接或者邻近连接技术。PLA技术是一种特殊的免疫分析方法，可用于检测目标蛋白，蛋白相互作用等等。该方法通过一对标记有一段寡聚脱氧核苷酸(单链DNA)的单克隆或者多克隆抗体的探针，即PLA probe（探针），识别目的蛋白，当这两个探针识别同一个蛋白时，两个探针之间的距离靠近，产生了所谓的邻近效应（proximity）。此时，通过加入一段分别与连接在抗体上的DNA互补的连接寡聚脱氧核苷酸（connector
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T4 DNA 连接酶连接 RNA 分子
T4 DNA 连接酶可将双链复合物缺刻连接，其中包括 RNA-DNA 杂合链及 RNA-RNA 杂合链。
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连接为双标签实验
是对差异显示技术（DD）实验和基因表达系列分析实验中实验方案A和B的补充实验现代神经科学研究技术作者：U.Windhorst & H. Johansson 翻译：赵志奇 陈军
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用 T4 DNA连接酶连接RNA分子
一材料与设备1)T4DNA 连接酶2)T4 多聚核酸激酶3)RNA 供体4) 受体5) 寡核苷酸 cDNA 模板6)10X 连接缓冲液：500 mmol/LTris-HCl(pH7.5)，100 mmol/LMgCl2，200 mmol/LDTT,0.5 mg/mLBSA(适用 NewEngtandBiolabs 连接酶）或 660 mmol/LTris-HCl(pH7.6)，66 mmol/LMgCl2,lOOmmol/LDTT(适用于 Amersham/USB 连接酶）
操作方法所属实验： T4 DNA 连接酶连接 RNA 分子
连接为双标签实验
实验方案 A1.此实验方案中，两部分补平的 cDNA 标签（源于同一 cDNA 合成反应）结合形成双标签。加入下列物质：2.在 16℃ 下孵育过夜。实验方案 B1.补平标签结合成双标签，需加入下列物质:2.在 16℃ 下孵育过夜。
操作方法所属实验：连接为双标签实验
【求助】DNA复制时连接冈崎片断的酶是聚合酶还是连接酶？
huahualian7 急急急问：DNA复制时连接冈崎片断的酶是聚合酶还是连接酶？ 谢谢啊！ zhujoker 聚合酶 yuxiongying DNA聚合酶1填补冈崎片段引物切除后的空隙，然后连接酶连接两个相邻的冈崎片段 本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴 师兄微
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DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列有专一性要求么
相关专题 重组DNA技术工具酶 DNA连接 酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求? 一、矛盾之处： (一)DNA连接 酶对所连接的DNA两端碱基序列不具有专一性要求 支持这一观点的是2008年江苏高考32题，请看具体内容及图示，如下： 32.(8分)将动物致病菌的抗原 基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表
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DNA片段连接
1.取200ul离心管按下表加入试剂。2.混匀后点动离心，将溶液甩至管底。3.置于已调好温度为12℃-14℃水浴锅（或PCR仪）中。4.保温2h后取出。5.电泳检测。λ/EcoT14 I 样品 10ul（兼作 DNA Marker）+ 10X的loading bufferDNA连接样品：10 ul + 10X的loading buffer 2 ul6.DNA连接片段的电泳预期结果。
操作方法所属实验：DNA 的酶切与连接
平端连接法
，加入一滴矿物油覆盖于反应混合物上。 3. 用94℃变性1分钟，45℃退火1分钟， 72℃延伸2分钟， 循环35轮，进行PCR。最后一轮循环结束后， 于72℃下保温10分钟，使反应产物扩增充分。 二、电泳 取10 ul 扩增产物用1％琼脂糖凝胶进行电泳分析，检查反应产物及长度。 三、PCR产物的纯化 扩增的PCR产物如利用T-Vector进行克隆，可直接使用，如用平未端或粘性未端连接，往往需要将产物纯化。 1. 酚/氯仿法 （1）取反应产物加100 ul TE。 （2）加等体积氯仿混匀后用
操作方法所属实验：PCR 扩增产物的克隆
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