DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列有专一性要求么

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DNA连接 酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求?

一、矛盾之处：

(一)DNA连接 酶对所连接的DNA两端碱基序列不具有专一性要求

支持这一观点的是2008年江苏高考32题，请看具体内容及图示，如下：

32.(8分)将动物致病菌的抗原 基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。

<center> <img alt="DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列有专一性要求么?" height="455" src="http://img.dxycdn.com/trademd/upload/asset/meeting/2013/08/27/A1377590249.jpg" width="544" /></center>

由此题我发现，目的基因由两种限制酶切割，一端由EcoRI切出黏性末端，另一端由AluI切出平末端;载体质粒由两种限制酶切开，一端由EcoRI切出黏性末端，另一端由SmaI切出平末端。在构成重组 质粒时，两个黏性末端碱基互补，由DNA连接酶可以连接上磷酸二酯键，这没有疑议。但是另一端两个平末端也能由DNA连接酶连接上，并且原题中第(3)问“图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求? 。”答案为“否”。

也就是由此题我们可以得出一个结论：DNA连接 酶对所连接的DNA两端碱基序列不具有专一性要求，它可以连接任意的平末端。

(二)DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列具有专一性要求

请大家参看选修三《现代生物技术专题》第7页“思考与探究”的第一题，如下：

“1.限制酶在DNA的任何部位都能将DNA切开吗?以下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段：

(1) …CTGCA (2) …AC (3) GC…

…G …TG CG…

(4) …G (5) G… (6) …GC

…CTTAA ACGTC… …CG

(7) GT… (8)AATTC…

CA… G…

你是否能用DNA连接酶将它们连接起来? ”

《教师教学用书》第11-12页分别给出参考答案，具体内容为：

2和7能连接形成…ACGT…

…TGCA…;

4和8能连接形成…GAATTC…

…CTTAAG…;

3和6能连接形成…GCGC…

…CGCG…;

1和5能连接形成…CTGCAG…

…GACGTC…