DNA 的酶切与连接

实验分类：

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

DNA的连接和酶切可用于：（1）利用限制性核酸内切酶切割DNA和利用DNA连接酶连接DNA是DNA重组过程中的关键步骤之一；（2）成功的酶切和有效的连接为后续的外源基因进入宿主细胞进行表达提供了有效的实验材料。

来源：丁香实验

操作方法

质粒DNA酶切

1.在200ul的离心管中，按照下表加入试剂（单位：ul），混匀；点动离心将反应液甩至管底。37℃保温2h进行酶切反应。2.反应结束后，加入2ul 10x Loading Buffer钝化酶活性；（或：65℃，保温20min使酶失活）。3.电泳检测。酶切阴性对照：pUC19标样+10x Loading Buffer 2ul酶切样品：标准pUC19酶切样品10ul + 10x Loading Buf

DNA片段连接

1.取200ul离心管按下表加入试剂。2.混匀后点动离心，将溶液甩至管底。3.置于已调好温度为12℃-14℃水浴锅（或PCR仪）中。4.保温2h后取出。5.电泳检测。λ/EcoT14 I 样品 10ul（兼作 DNA Marker）+ 10X的loading bufferDNA连接样品：10 ul + 10X的loading buffer 2 ul6.DNA连接片段的电泳预期结果。