酶切、回收、连接 常识

 

转化

 

 

 

 

一．单选题

 

1 ．下列哪种DNA 结构在转化时能获得最高转化效率（ ）

 

A ．线形双链DNA B. 单链线形DNA C. 完整的环状双链DNA

 

D ．开口环状双链DNA E. A 和C

 

2 ．下列表型中，哪种是基因工程上的理想的受体菌表型（ B ）

 

A. r⁺ m⁺ rec⁺ B. r^- m^- rec^- C. r^- m⁺ rec⁺ D. r⁺ m⁺ rec^-

E. r^- m^- rec⁺

 

3 ．大肠杆菌出现感受态的生理期是 （ B ）

 

A ．潜伏期 B. 对数期 C. 对数后期 D. 平衡期 E. 衰亡期

 

4 ．CaCl₂ 法制备E.coli 感受态细胞时，摄入ＤＮＡ温度是（E ）

 

A ．0 ℃ B. 16 ℃ C. 37 ℃ D. 25 ℃ E. 42 ℃

 

5 ．关于感受态细胞的下列说法不正确的是（ C ）

 

A ．有人工感受态细胞和自然感受态细胞。

 

B ．具有可诱导性。

 

C ．有可转移性。

 

D ．不同种细菌出现感受态的生理时期不同。

 

E ．不同种细菌出现感受态的比例不同。

 

二．多选题

 

1 ．C aCl₂ 诱导E.coli 感受态细胞时，下列哪些因素会影响转化效率（A 、B 、C 、D 、E ）

 

A ．Ca²⁺ 浓度 B. DNA 纯度与构象 C. DMSO D. 温度 E. PH

 

2 ．人工诱导感受态细胞，下列方法哪些正确（A 、B 、C 、D ）

 

A ．CaCl₂ 处理 B. 核酸酶抑制法 C. 饥饿法 D. PEG 处理 E. DMSO

 

3 ．下列有关利用粘尾质粒将外源DNA 导入E.coli 中的说法正确的是（B 、C 、D 、E ）

 

A ．空cosmid 质粒可直接体外包装导入E.coli ，也可用CaCl₂ 法导入E.coli 。

 

B ．Cosmid/DNA 与头部蛋白、尾部蛋白混合，体外包装后可进入E.coli 。

 

C ．Cosmid 虽然只有4~6kb , 但可容纳约40~50kb 的外源DNA 。

 

D ．Cos 序列是DNA 包装到λ噬菌体颗粒中所需的DNA 序列。

 

E ．Cosmid/DNA 重组体包装后以双链线性分子形式导入E.coli 。

 

4 ．下列有关λDNA 重组体导入E.coli 说法正确的是（A 、B 、C ）

 

A ．λDNA 重组体必须有效包装后才能有感染E.coli 的活性。

 

B ．λDNA 重组体包装要有头部蛋白、尾部蛋白的参与。

 

C ．λDNA 重组体包装长度为野生型λDNA 的75~105% 。

 

D ．λDNA 重组体是以双链环状形式导入E.coli 。

 

E ．λDNA 重组体用CaCl₂ 法导入E.coli 也能取得高转化率。

 

5 ．下列关于CaCl₂ 处理获得感受态方法的说法正确的是（A 、B 、C 、D ）

 

A ．DNA 与Ca²⁺ 结合后吸附在细胞表面，该复合物可抵抗细胞表面的DNAase 作用。

 

B ．DNA ―Ca²⁺ 在0 ℃时吸附于细胞表面，温度高或温度波动会大大降低转化效率。

 

C ．有可能将两种质粒转入同一细胞但最终选择板上的菌落只含一种质粒。

 

D ．42 ℃热休克是为了让DNA 进入感受态细胞。

 

E ．热休克后要37 ℃温育1 小时，目的是使含有外源DNA 的细胞分裂1~2 代，更易筛到重组子。

 

三．填空题

 

1 ．感受态细胞是指 具有摄取外源 DNA 分子能力 的细胞。

 

2 ．λ噬菌体蛋白对重组DNA 体外包装时，包装长度为野生型λDNA 的 75~105% 。

 

3 ．感受态大肠杆菌细胞在温度为 0 ℃ 时吸附DNA ，42 ℃ 时摄入DNA 。

 

4 ．CaCl₂ 法制备感受态细胞转化DNA 时，DNA 以 DNA-Ca²⁺ 复合物形式吸附于细胞表面。

 

5 ．基因工程受体菌的基因型常为r^- m^- rec^- , r^- 表示 限制缺陷型 ， m^- 表示 修饰缺陷型 ，rec^- 表示 重组缺陷型 。

 

6 ．CaCl₂ 法制备感受态细胞转化DNA 时，热休克的温度是 42 ℃ 。

 

7 ．E.coli 感受态出现的生理时期是 对数期 。

 

四．简答题

 

1 ．简述在CaCl₂ 法制备感受态细胞转化DNA 时，影响转化效率的各种因素。

 

答：影响因素有：Ca²⁺ 浓度、PH 值、感受态细胞活力、DNA 浓度、DNA 纯度和构象、温度、DMSO 处理、还原剂处理、氯化六氨合高钴处理。

 

2 ．CaCl₂ 法制备感受态细胞转化DNA 时，低温的主要目的是什么？热休克温度和目的是什么？

 

答：低温目的：（1 ）抑制细胞的旺盛生理代谢；（2 ）有助于DNA ―Ca²⁺ 吸附于细胞表面；（3 ）防止DNAase 降解DNA 。

 

热休克温度是42 ℃；目的是使细胞摄入吸附于其表面的DNA 。

 

3 ．简述利用Cosmid 将外源DNA 导入E.coli 的特点是什么？

 

答：（1 ）Cosmid 大小为4~6 kb ，可用常规CaCl₂ 法直接导入E.coli 扩增。

 

（2 ）Cosmid 含cos 位点，是DNA 包装到λ噬菌体蛋白颗粒中所需的DNA 序列，cosmid/DNA 重组体需与λ噬菌体头、尾部蛋白混合体外包装后，才能导入E.coli 。

 

（3 ）其包装长度为野生型λ噬菌体DNA 的75~105% ，可容纳较大片段（30~50kb ）DNA ，可用于建立真核细胞文库。

 

（4 ）只有重组体可包装，未重组cosmid 不能包装，因而不能进入E.coli 有利于克隆的筛选。