酶切、回收、连接 常识

 

9 ． 限制酶反应结果若显示没有切割，可能原因是（A ，B ，C ，D ，E ）

 

 

A ． 限制酶无活性 B 存在抑制剂如SDS ，EDTA C DNA 不纯

 

D ． 缓冲液组成不合适 E DNA 甲基化

 

10 ．下列关于限制酶的叙述正确的是（B ，C ，D ）

 

A ． 在限制与修饰系统中，修饰主要是甲基化作用，一旦位点被甲基化了，其他限制酶就不能切割了。

 

B ． 限制酶在DNA 中的识别/ 切割位点的二、三级结构影响酶切效率。

 

C ． 如果限制酶的识别位点位于DNA 分子末端，那么接近末端的程度也影响切割。

 

D ． 已知某限制酶在一环状DNA 上有3 个切点，因此该酶切割这一环状DNA ，可得到3 个片段。

 

E ． 能产生防御病毒侵染的限制酶的细菌，其自身的基因组中没有该酶识别的序列。

 

11 ．酶在储存过程中迅速失活，可能原因是（A ，B ，C ，E ）

 

A ． 储存温度不合适 B 稀释后储存 C 储存缓冲液不合适

 

D ． 分装后储存 E 储存缓冲液中蛋白浓度低

 

12 ．限制酶切反应结果显示为部分切割，可能原因是（A ，B ，C ，D ，E ）

 

A ． 限制酶失活 B 有抑制剂如SDS ，EDTA 等存在 C 反应条件不合适

 

D DNA 不纯 E DNA 结构（线形或超螺旋）的影响

 

13 ．如果用限制酶切割DNA 后得到的片段比预期的多，可能原因是（B ，C ，E ）

 

A ． 限制酶失活 B 限制酶的星号活性 C 有其他限制酶污染

 

D 有抑制剂存在 E 测试DNA 中有其他DNA 污染

 

14 ．限制酶切割后的产物连接反应效果差，可能原因是（A ，B ，C ，E ）

 

A ．限制酶去除不完全 B 平端连接 C 核酸外切酶污染

 

D ．连接反应温度低于16 ℃

 

E ．从限制酶消化中带来太高浓度的磷酸盐或其他盐类

 

15 ．下列限制酶属同裂酶的是（A ，B ，D ，E ）

 

A ．BamHI G ↓GATCC Sau3AI ↓GATC

 

CCTAG ↑G CTAG ↑

 

 

 

B ． Sal I G ↓TCGAC Xho I C ↓TCGAG

 

CAGCT ↓G GAGCT ↓C

 

C ． BamH I G ↓GATCC EcoR I G ↓AATTC

 

CCTAG ↓G CTTAA ↓G

 

D. Hpa II G ↓CGC Msp I C ↓CGG

 

CGC ↓G GGC ↓C

 

E. Xba I T ↓CTAGA Nhe I G ↓CTAGC

 

AGATC ↓T CGATC ↓G