PLA（邻近连接）技术简介

PLA技术全称为Proximity Ligation Assay，国内译为邻位连接或者邻近连接技术。PLA技术是一种特殊的免疫分析方法，可用于检测目标蛋白，蛋白相互作用等等。该方法通过一对标记有一段寡聚脱氧核苷酸(单链DNA)的单克隆或者多克隆抗体的探针，即PLA probe（探针），识别目的蛋白，当这两个探针识别同一个蛋白时，两个探针之间的距离靠近，产生了所谓的邻近效应（proximity）。

此时，通过加入一段分别与连接在抗体上的DNA互补的连接寡聚脱氧核苷酸（connector oligonucleotides），PLA probe上的DNA就会通过配对互补作用，与该段DNA互补，然后在连接酶的作用下，PLA probe上的片段DNA被连接在一起形成一条新的DNA片段。通过荧光PCR可以扩增并对该新的DNA片段进行定量，从而对应的定量目标蛋白。

最先报道的PLA技术基于结合凝血酶不同表位的两条DNA适体（aptamers）。适体是具有与抗体可比的识别性能的单链核酸，它们可以折叠成复杂的3D结构从而特异性结合大量的目的蛋白。它们是通过筛选1012-1016个可以结合目的蛋白基序的寡核苷酸组合文库的到的。尽管适体很早出现，但由于其亲和力弱（因此敏感度低）没能被广泛应用。

目前应用较为广泛的是在液相PLA的基础上引入了一个捕获抗体，该捕获抗体被固定在固相载体上（磁珠、微孔板等），当目标蛋白被捕获后，通过Proximity Probe进行识别和定量。

美国俄亥俄州立大学的研究人员2011年开发一种称为荧光原位基因蛋白分析（fluorescent in situ gene protein assay）的新技术，将传统的荧光原位杂交（FISH）与原位邻位连接分析（in situ proximity ligation assay，简称PLA）相结合，能同时观察细胞中的基因数量和蛋白表达。此技术能够详细分析基因状态以及相应蛋白表达之间的关联，并更透彻地了解癌症及其他复杂疾病。该成果发表在《神经肿瘤》（Neuro-Oncology）上。

邻近连接测定的方法不同于其他基于抗原抗体反应的原位杂交应用，是由于其使用两种抗体（而不是单个抗体）识别相同蛋白的不同表位从而增加了蛋白特异性。此外，使用两种抗体识别不同蛋白质既可显示位置又可对蛋白质相互作用进行定量。在目的蛋白的内源表达水平上，检测步骤的信号增强为研究稳定和瞬时相互作用提供独有的能力。配合各种图像处理及分析系统，PLA高度适合于高通量的细胞，为基础的筛选实验。