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质粒转化

将质粒 DNA 导入细菌

实验概况收录 2 操作方法 · 2 相关问答 · 3 相关文章

质粒提取

从细菌中提纯质粒DNA

实验概况收录 1 操作方法 · 3 相关问答 · 3 相关文章

质粒改组

第 1 天将菌株 7-2 在 YPD 平板上划线，30°C 培养。第 3 天挑一个丰满的菌株 7_2 菌落，接种到 5 mlYPD 培养液，30°C 下培养过夜。第 4 天使用血球计数板（附录 G，用标准血球计数板进行酵母细胞计数）测定 5 ml 菌株 7-2 培养物的细胞密度。用 50 mlYPD 培养液将细胞稀释至 5X106 个/ml，置 30°C 培养细胞到两次分裂（约 4 h)。按照「技术和方案 1，酵母的高效转化」收获细胞，用 lOOng 诱变的 PDB141 质粒进行转化（提供

操作方法所属实验：基因置换实验

穿梭质粒

1)构建染色体上重要基因被破坏的单倍体菌株以及含有完整重要基因和URA3选择标记的YEp或YCp质粒。2)对于诱发突变，将重要基因亚克隆到带有不同选择标记的YCp载体上，将大约10〜20μg DNA采用羟胺或其他技术进行诱变。或者将一个重要基因的突变衍生物克隆到YCp载体上。3)用乙酸锂法将其转化入第1步中的菌株，利用添加了尿嘧啶的缺失成分平板选择 YCp质粒，在许可温度下进行培养（一般为25℃)。在尿嘧啶存在的情况下，生长周期降低了对YEp质粒的选择性，也就是在每个转化菌落中，一部

操作方法所属实验：酵母细胞中质粒的加工实验

问质粒测序

Dr_劉医生

28a的分子量太小了，pcr扩增结果跑不完整

实验问答2 回答297 围观

问提质粒方法求助

土井挞克树

不是越大越好，而是适中，建议你先预实验确定一下合适浓度

实验问答1 回答639 围观

质粒提取

一、导论已经提出过许多方法用于从细菌中提纯质粒DNA，这些方法都含有以下3个步骤: 细菌培养物的生长。细菌的收获和裂解质粒DNA的纯化。 (一)细菌培养物的生长从琼脂平板上挑取一个单菌落，接种到培养物中(有含有行当抗生素的液体培养基中生长)，然后从中纯化质粒，质粒的提纯几乎总是如此。现在使用的许多质粒载体(如pUC系列)都能复制到很高的拷贝数，惟致只要将培养物放在标准LB 培养基中生长到对数晚期，就可以大量提纯质粒。此时，不必造反性地扩增质粒DNA。然而，较长一代的载体(如pBR

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【求助】ISRE质粒

summityoung 那位学长有ISRE质粒，谢谢。我有多种质粒可以交换 zfv2007 Do you have any lentivirus plasmid? zhujoker 我有，就是具有IRES启动子的质粒吗？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

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质粒的制备

质粒的制备可以用于（1）携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体，它在基因操作中具有重要作用；（2）质粒的分离与提取是最常用、最基本的实验技术。

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质粒 DNA 提取实验

质粒DNA提取可以：（1）快速纯化质粒；（2）用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。

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质粒提取

1. 挑取含有目的DNA重组体的单个菌落接种在3 ml LB（含有Amp或Kan）液体培养基中，37 ℃，225 rpm培养12～16 hrs。 2. 提取质粒 ⑴离心菌液，废弃上清。 ⑵加入250 ul Buffer P1，使菌片重悬，务必使片状物不可见。 ⑶加入250 ul Buffer P2，上下颠倒EP管4～6次，操作时间要少于5 min。 ⑷加入350 ul BufferN3，上下颠倒EP管4～6次，可见絮状沉淀。 ⑸离心13000 rpm，10 min。 ⑹离心后的上清液移入

操作方法所属实验：含有目的基因真核表达 pEGFP-C1 载体的构建实验

转化含有质粒的菌株

1. 在一个 250 ml 的培养瓶中，接种该菌株到 25 ml 相应的 SC 减样选择培养基中，200 r/min 培养过夜。2. 检测每毫升细胞数，按 2.5X108 个细胞计算所需培养物体积。3. 将该体积的培养物加到一个 50 ml 的无菌离心管中，3000 g 离心沉淀细胞。4. 倒掉培养基，用 50 ml 预热的 YPAD 重悬细胞，转移到一个 250 ml 的培养瓶中。5. 继续按高效转化法中步骤 4 进行操作。

操作方法所属实验：酿酒酵母的 LiAc/ssDNA/PEG 高效转化法实验

问质粒构建

Eason老歌迷

既然已经换引物了，说明不是引物的事，还是质粒啊，有没有一种可能，发生了自连?

实验问答1 回答520 围观

问质粒转染中，在不对细胞活率影响下，平均单个细胞能承受多少拷贝质粒，或多少质量的质粒？

汤姆卜丽波

一般单个细胞根据质粒的大小来看，转染效率比较好的话可以接受2-3个，差不多的话基本一对一

实验问答2 回答545 围观

【求助】Notch1质粒

polo6892 请问哪个实验室的同学或是老师有Notch1质粒，有点朋友请和我联系下好吗？有事情咨询！多谢！我的EMAIL ：zhouwei5352877@163.com,QQ 286358161,我是武汉大学人民医院实验室的研究生！谢谢！ liudaifu1997 我也感兴趣，等 qinvicky 我们实验室做基因转染的，一直用N2质粒，不过我懂得不是很多~不知能否帮

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【求助】吉玛的shRNA质粒怎么样??

443201299 吉玛的shRNA质粒怎么样??吉玛的shRNA质粒最便宜，但不知道它的质量如何，有谁用过吗？感觉质量怎么样？西厢蔷薇买过几次，一般吧。 443201299 下调效率怎么样？？ shylook 还是不错的 443201299 吉玛的shRNA质粒载体好像是最便宜的！西厢蔷薇

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质粒构建技术

质粒作为低等生物体内的最小遗传单位，具有分子量小、复制速度快等诸多优点，质粒构建为生物工程提供工具载体。

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粘粒和质粒文库的扩增实验

文库一旦包装就应该尽快进行扩增，它可以大大增加文库的拷贝数，但在扩增时由于克隆的生长速率不同，文库的组成可能会出现某种潜在的改变。这种文库克隆组成比率的变化可以通过把文库克隆预吸附到细菌上并使用一种高密度铺平板和短期培养的方法而尽量减少。

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质粒DNA酶切

1.在200ul的离心管中，按照下表加入试剂（单位：ul），混匀；点动离心将反应液甩至管底。37℃保温2h进行酶切反应。2.反应结束后，加入2ul 10x Loading Buffer钝化酶活性；（或：65℃，保温20min使酶失活）。3.电泳检测。酶切阴性对照：pUC19标样+10x Loading Buffer 2ul酶切样品：标准pUC19酶切样品10ul + 10x Loading Buffer 2ul4.质粒及酶切样品电泳预期结果。

操作方法所属实验：DNA 的酶切与连接

🔥 同源重组法构建质粒

质粒的构建是分子生物学研究中常用的实验技术，质粒是能够自主复制的环状 DNA 分子，将特定的基因序列插入到工程质粒中，再把质粒转化到细菌、细胞或酵母中，使质粒在其中表达。

操作方法所属实验：质粒构建技术