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泛素（ubiquitin，Ub）是由 76 个氨基酸组成的 8.6 kDa 的蛋白质分子，在细胞中广泛存在。它的 C－末端的甘氨酸残基提供了一个与其他蛋白质分子连接的游离羧基，可共价结合在其他蛋白质分子的赖氨酸侧链氨基上，称为泛素化（ubiquitination）。此外，泛素中含有 7 个赖氨酸残基，其中 Lys－48、Ly－63、Lys - 29 均能通过与另一分子 Ub 的 C－末端连接而形成不同形式的多聚 Ub 链。结合多个 Ub 时称为多泛素化，单一 Ub 结合即为单泛素化

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转印到膜上的蛋白质检测实验

从聚丙烯酰胺凝胶转印到膜上的蛋白质可被染色。如果制备双份样品旳话，一半可用于染色以确定转印的效率，另一半可用于免疫印迹分析。提供了适用于转印膜和凝胶染色的方法及其检出极限。

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蛋白质泛素化

1、步骤见 Western blot;2、质谱：① 细胞或组织蛋白抽提，非接触式超声破碎；② 泛素化肽段富集（偶联泛素结合结构域 UBD 的磁珠，UBD 结合下的泛素化蛋白在胰蛋白酶的作用下赖氨酸残基被保留）；③ 溶液内蛋白酶切；④ HPLC 肽段分离；⑤ 串联质谱分析；⑥ 泛素化位点数据分析

操作方法所属实验：蛋白质泛素化分析

方案3 检测 PVDF 膜上的蛋白质实验

1.依方案2 电转移后，将 PVDF膜迅速放于塑料容器中，并加人考马斯亮蓝染色液浸没膜。室温下染 5〜10 min 。2.弃去染色液，加人脱色液浸没膜，在 PVDF 膜完全脱色后换液。大约共需换 3〜4 次脱色液，共脱色 30min 到 1 h 。3.用水洗 PVDF 膜约 5〜10 min 。4.重复洗膜 5 次以上。

操作方法所属实验：蛋白质氨基端及羧基端序列分析实验

问泛素化检测的免疫共沉淀怎么看

loveliufudan

WT和CS是两种不同的样品，可能是不同条件下的实验组和对照组。IP代表免疫共沉淀实验，是用来检测蛋白质相互作用的一种方法。在这个实验中，V5-TRABID是用来“鱼”Flag-VPS34的。Lysate是细胞裂解液，代表实验样品。His-Ub可能是用来标记Ubiquitin的，Ubiquitin是一个重要的信号分子，它可以和目的蛋白发生共价结合，形成泛素化修饰。His可能是Histidine的缩写，是一种常用的蛋白质标签。Flag-VPS34、V5-TRABID、Flag-TRABID是不同

实验问答3 回答4762 围观

问如何检测两个蛋白质相互作用的强弱？

丁香实验

免疫共沉淀Co-IP。1. 转染，A与WT/MUT分别共转细胞；2. 裂解后，用anti-A抗体与lysates孵；加入结合抗体的proteinA/G beads结合；3. 洗beads。4. 洗脱。5. WB，观看结合在beads上的A,B多少。A做内参control。看结合的B的差别。

实验问答1 回答816 围观

蛋白质泛素化检测

0:10 内容简介10 0:21 订阅内容21 0:42 目的蛋白的表达和纯化、泛素标记42 3:15 免疫沉淀反应195 4:51 SDS-PAGE电泳和免疫染色291 5:48 体外检测蛋白质泛素化348 7:02 代表性结果422 8:22 结论502 蛋白质泛素化检测本视频来源于网络，如有异议请联系我们，我们将在5个工作日内作出处理。

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蛋白质免疫检测技术服务

Western Blot 实验通过SDS-PAGE胶将不同的分子量的蛋白分离开，将目标蛋白转移到PVDF膜上，再利用抗原抗体的特异性结合，用特异性的一抗结合目标蛋白，用HRP标记的二抗结合一抗，再加以ECL发光液显色，检测目的蛋白在不同处理的样本中表达量的高低变化服务优势及实验服务流程： 1、利用高性能试剂配合高通量全自动western blot机，提供超高灵敏性的western blot实验服务。超高灵敏度最低至15飞克抗原。 2、一抗的寄送需要泡沫盒加冰袋低温即送

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蛋白质糖基化的检测实验

本实验主要用于检测蛋白质的糖基化，是衡量蛋白质类药物的一项重要指标。

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蛋白质寡聚化检测

寡聚化指单体化合物之间形成二、三、四聚体或长链分子（低聚物）。在生物背景下，寡聚化通常是指生物大分子（如蛋白质）通过非共价相互作用形成大分子复合物的过程。在生理或病理状态下，生物体内都会有寡聚化的现象。

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方案11 蛋白质阵列：标记蛋白并通过阵列检测来探究蛋白质-蛋白质相互作用

2~3 min。9.用 PBS(没有 Tween-20 的）将玻片轻微冲洗后，用一配置有可放置玻片转子的离心机，在 200 g 条件下离心 30s，以去除残留的缓冲液。若没有合适的转子配置，也可以采用通氮气流的方法来干燥玻片。10.用荧光玻片扫描仪检测玻片的成像（参见「10.8.4 阅读和解析蛋白质陈列）。

操作方法所属实验：蛋白质复合体性质的研究

用 GST 融合蛋白检测蛋白质-蛋白质相互作用实验

上或结合的谷胱甘肽-琼脂糖上切割下来，见 15 章方案 5。此方案步骤 5 需要含待检测蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶（请见附录 8) 或含 cDNA 表达文库的板（请见 14 章方案 2），以及附录 8 中描述的免疫印迹试剂。单独的 GST 或一种非特异性蛋白质的阴性对照应当和靶蛋白一起加入到 SDS 聚丙烯酰胺凝胶中。如果目标蛋白是一保守家族的成员，目标蛋白的相互作用可与同一家族的其他蛋白质进行比较。载体和菌株结合到谷胱甘肽-球脂糖的 GST 融合蛋白这一方案适合于融合蛋白中含蛋白质激酶磷酸化位点的蛋白质

操作方法所属实验：用 GST 融合蛋白检测蛋白质-蛋白质相互作用实验

问想问一下为什么做泛素化检测时都要转一个HA-Ub呀？

bamboopiggy

因为单纯泛素化的抗体不好做，用ha的抗体比较好检测

实验问答4 回答9390 围观

问表面等离子共振法能检测蛋白质直接相互作用吗？

Dr_劉医生

可以，表面等离子共振技术是一项用于分析生物大分子之间的相互作用的技术，它可以定性的判断两分子之间是否有相互作用，比较一种分子与其他几种分子之间相互作用的强弱。

实验问答2 回答383 围观

蛋白质检测

・ Protein detection (Aberdeen's Lab) The method used to locate the proteins following 2D-PAGE depends on the nature of the original sample. ・ Protein detection(Silver staining) (ExPASy) The application

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BCA蛋白质定量检测

主要特点：· 准确灵敏：BCA试剂的蛋白质测定范围是20－2000μg/ml,采用加强方法可检测到5μg/ml；MicroBCA试剂测定范围是0.5-20μg/ml。· 快速：45分钟内完成测定，比经典的Lowry法快4倍而且更加方便。· 经济实用：除试管外，测定可在微孔板中进行，大大节约样品和试剂用量。· 不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。· 检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考玛斯亮蓝。基本原理：碱性条件下，蛋白将Cu ++ 还原

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用 GST 融合蛋白检测蛋白质-蛋白质相互作用实验

GST 融合蛋白作为在细菌中表达的重组蛋白，从它们被介绍以来，已用于成千上万个研究项目中（Smith and johnson 1988)。它们常常被用于制备抗体，这些抗体可用于研究蛋白质-蛋白质相互作用以及分析生化反应。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔。

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Lowry 检测法测定蛋白质浓度实验

Lowry 法是标准、快速的蛋白质定量检测方法，已得到广泛应用在检测之前可通过蛋白质沉淀将干扰物质去除。来源：《蛋白质技术手册》

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GST 融合蛋白沉降技术检测蛋白质

/L Tris-Cl(pH8.0) 中的还原型谷胱甘肽（20 mmol/L)可选，请见步骤 8。2xSDS-PAGE 加样缓冲液凝胶SDS 聚丙烯酰胺凝胶关于 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳的详情请见附录 8。专用设备沸水浴翻转祥品旋转仪谷胱甘肽琼脂糖球珠在裂解缓冲液中制成 50% 悬液。探针GST 蛋白带有“诱饵”或探针序列的 GST 融合蛋白按第 15 章方案 1 描述的方法构建。细胞和组织细胞裂解液，其中蛋白质 35S 用标记根据实验目的和所需检测方法，可用非标记的细胞裂解液。进一步的详情，请见

操作方法所属实验：GST 融合蛋白沉降实验

X射线片放射自显影检测32P标记的蛋白质

，于 -70℃ 曝光。4. 冲洗 X 射线片，显影。5. 依放射性记号，在读片机里将考马斯亮蓝染色胶与放射自显影图排列好，鉴定磷酸化靶蛋白，拍照。6. 切下含靶蛋白的胶条，用液闪计数器检测磷酸化蛋白的放射性。

操作方法所属实验：蛋白质磷酸化的测定实验