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细胞培养与基因治疗技术指南

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环境对果蝇基因表达的效应实验

表型的许多方面都受到生物体遗传组成和其生存环境的影响,因此可以说表型是基因型与环境相互作用的产物。果蝇卷曲翅基因的表达常受到环境的修饰,通过观察该基因在不同环境下的表达情况,即可显示环境对基因表达的影响。卷曲翅基因(cu)对温度敏感,纯合体(cu/cu)果蝇在高温下培养时翅膀顶端弯曲(图7-1),但同样基因型的果蝇在低温下培养时部分个体具有直翅膀,因此可以说cu等位基因的外显率(penetrance)是不完全的。另一方面,特别是在低温下培养的果蝇翅膀表现出不同程度的卷曲,这样可以说该基因的表现

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通过 cDNA 宏阵列和基因表达谱检测环境毒物的毒理效应实验

本章主要介绍如何通过制备和使用 cDNA 宏阵列来检测环境毒物对基因表达的影响，同时具体介绍实验所用到的材料与方法。由于一些非传统模式的物种研究购买不到商业化的芯片，应用本章讲述的方法，研究人员可以自行设计和使用适合自己实验目的的芯片。我们有意略去了实验中统计分析方面的内容，因为统计分析的方法仍有待进一步发展，而且不同的实验必须针对性地应用不同的统计方法。总之，基因宏阵列是相对简便的高通量的检测方法。作者：马丁,本实验来自「环境基因组学实验指南」

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通过 cDNA宏阵列和基因表达谱检测环境毒物的毒理效应实验

分光光度计测定浓度。（12）如果产物量不够可以重新扩增克隆，重新扩增的产物可以与第一次的合并。阵列点印需要的浓度不能低于 160 ng/ V L 。2 阵列点印（1）在这步开始之前，首先应该将阵列上要点印基因的位置安排好。我们往往是将基因两两重复地点上去（见注释 1)，不要忘记阵列中必须包括对照点（见注释2 和 3)。（2）将纯化过的 DNA 稀释后（3000 ngDNA 加到 18. 75μL 水中，终浓度为 160 ng/ μL 加到点印所用板的对应孔中。（3）再向每孔中加入 1.9 μ m

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应用抑制性消减杂交检测环境样品中元基因组多样性实验

?^- sion Prof ilin g ’’卷的 “Suppression Subtractive H ybridization” 章节（ 5Q)。 3. 2.1 元基因组 D N A 限制性酶切消化用测试子、驱动子元基因组D N A 和对照 E . 基因组 D N A 进行下列实验。驱动子 D N A 用来消减与测试子D N A 共同的片段，从而富集测试子 D N A 特有的片段。该技术成功的关键是测定所使用的限制性内切酶的效价。具体地说，如果消化没有进行，将会影响

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问有关pcr mapping分析基因环境结构的问题

Eason老歌迷

引物长度一般在15-30bp。常用的为18-27bp。引物GC含量一般为40%-60%， 45-55%为宜。引物所对应的模板序列的Tm值在55-80℃之间。可以用ncbi查，然后用Primer Premier设计

实验问答4 回答618 围观

问SMN1和SMN2基因碱基替换c.840C/T

汤姆卜丽波

同位基因840位点出现C碱基和T碱基的替换

实验问答2 回答480 围观

基因cloning经验指南

我们克隆基因的时候，往往可以通过一些途径（如pcr,EST库或者文库筛选）得到基因的部分片段。然后通过3'race 和 5'race 方法往两端延伸。有时会出现无法延伸的状况，如果你超作没有失误的话，这时候很有可能是你模板GC含量过高的缘故，普通pcr 是没有办法延伸的，可以用扩高gc 含量模板的Taq酶和BUffer就可以成功。这是我克隆基因中获得的经验。

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基因cloning经验指南

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应用抑制性消减杂交检测环境样品中元基因组多样性实验

方法，可用于比较近缘种微生物的基因组组成（3-6)。最近， S S H 也作为一种比较方法，研究了两种不同瘤胃微生物群落基因组成的微生物多样性和功能差别（7)。经过一系列的杂交和聚合酶链反应（P C R ) 扩增后，两种环境样品的元基因组差异能够通过 S S H 方法分离。最终通过序列 D N A 测定和生物信息学分析对这些差异进行鉴定。作者：马丁,本实验来自「环境基因组学实验指南」

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cDNA文库的构建和筛选—在外界环境压力条件下，新表达基因的鉴定方法实验

材料许多生物是疾病研究或探索使细胞和机体应对和存活于不同刺激下的分子适应机制的优良模型。 cDNA 文库的构建和随后目的基因的筛选可促使研究者发现在调节和响应某些外部特定环境压力中有重要作用，而在其他体系中可能不表达或者不存在的新基因。确定这些新基因的可读框，进一步分析其编码蛋白质的功能可以开创全新的研究领域并可以更科学地设计下一步的研究方案。作者：马丁,本实验来自「环境基因组学实验指南」

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cDNA文库的构建和筛选 —在外界环境压力条件下，新表达基因的鉴定方法实验

许多大规模的基因组计划面临的挑战。 mRNA 序列包含许多信息，但常规来说蛋白质才是功能执行者。为了预测某一特定基因的功能，常常将基因序列翻译成预测的蛋白质序列来分析与已知功能蛋白的同源性和保守区域。许多情况下，一个 cDNA 克隆通常代表了一个已知的同源物。这些克隆所代表的基因或蛋白质通常可与现有的功能模式相匹 E ，因为这些基因很可能已在其他系统、器官、组织(在各类应激和环境条件下）中被鉴定出，并具有已知的作用和功能。然而，如果目的克隆没有任何已知的同源物，则需进行进一步的分析和鉴定

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高通量整体原位杂交检测环境干扰斑马鱼胚胎组织特异性基因表达改变实验

在格孔间移动原位杂交篮的平头镊子。（5）用于移动胚胎的玻璃移液管。2 地高辛（Digoxigenin， DIG) 探针的制备（1）f X g 包含目的基因的纯化的线性质粒（见注释 2)。（2）IOXDIG 标记混合物： 1 0 mmol/L A T P ， 1 0 mmol/L C T P ， IOmmolZLGTP,6. 5 mmol/L UTP, 3. 3 mmol/L DIG-11UTP (Roche)0（3）转录缓冲液和牛血清白蛋白（BSA) /二硫苏糖醇（DTT; 同酶一起

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问急急急！回复审稿人问题

土井挞克树

吸烟作为独立因素是否需要独立分析。

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问肿瘤样本测点什么好呢

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基因突变就是癌症发生的根本原因。所以可以测肿瘤的基因，如下：基因检测是通过血液、其他体液或细胞对DNA进行检测的技术，是取被检测者脱落的口腔黏膜细胞或其他组织细胞，扩增其基因信息后，通过特定设备对被检测者细胞中的DNA分子信息作检测，预知身体患疾病的风险，分析它所含有的各种基因情况，从而使人们能了解自己的基因信息，改善自己的生活环境和生活习惯，避免或延缓疾病的发生。应用包括1、遗传性肿瘤基因检测2、化疗用药指导方面的基因检测3、肿瘤个体化用药指导基因检测4、组织与外周血检测的异同5、肿瘤的异质

实验问答2 回答419 围观

三句话读懂一篇 CNS，酗酒背后的机制，环境-基因互作诱导肿瘤发生，Cas9 时钟...

！图片来源：Science Advances 6. Nature: 环境改变诱导肿瘤发生伴随着环境污染与人类不健康的作息方式，癌症已成为威胁人类正常寿命的头号杀手。 2021 年 2 月 3 日，美国斯隆・凯特琳纪念癌症中心 Scott W. Lowe 课题组在 Nature 杂志发表论文 A gene–environment-induced epigenetic program initiates tumorigenesis，研究人员通过整合基因组学、单细胞染色质分析和喂养小鼠时空调控功能扰动

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Visium 空间基因表达解决方案-样本冰冻包埋指南

正所谓“九层之台,起于垒土”，同样，要想拿到优秀的空间转录组实验结果，样本制备也是至关重要的！目前10x Genomics推出的Visium空间基因表达解决方案，支持新鲜/冷冻切片，优化升级后还可以支持FFPE样本，甚至结合免疫荧光染色。今天小编着重为大家介绍一下Visium 空间基因表达解决方案样本冰冻包埋的那些事儿！ Visium 空间基因表达解决方案支持的样本类型目前，10x Genomics官网已经测试过的组织类型包括：人类：心脏，肾脏（正常和肾炎），卵巢，乳腺

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高通量整体原位杂交检测环境干扰斑马鱼胚胎组织特异性基因表达改变实验

整体原位杂交是一个可以观察完整生物体内细胞基因表达（mRNA) 的过程。通过比较不同环境下生物体的基因表达区域的差别，有助于我们理解环境暴露对细胞和组织的特异性影响。这个技术是对现有的基因表达谱技术的补充，例如 D N A 芯片技术只能反映一个生物或组织的基因表达水平的变化。作者：马丁,本实验来自「环境基因组学实验指南」

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使用荧光原位杂交技术对人类和小鼠精子中染色体结构畸变探测的实验室方法

这种新一代的精子 F I S H 方法已经鉴定出了多种父系风险因子，比如年龄、多种药品、生活方式，以及环境方面和职业方面暴露的问题。这些精子 F I S H测定法提供了新的机会，来鉴定和特征化与遗传、生活方式和黄精因素相关的男性生殖风险。本章概述了用来探测有染色体结构畸变的人类（A C M 测定法）和小鼠（C T 8 泖 1定法）精子的实验室方法，这些方法已被证实能有效地探测干细胞环境诱变剂。作者：马丁,本实验来自「环境基因组学实验指南」

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使用 PDS-1000/He 基因枪轰击

注意：由于基因枪通过高压使粒子加速到极高的速度，故操作基因枪时应采取适当的安全措施并且佩戴安全眼镜。在任何使用基因枪转化的实验中，必须设置对照检测分化和选择效率（见注 40) 。( 1 ) 根据 PDS-1000/He (见图 4.2 ) 基因枪操作指南操作，将 DNA 包埋的金粉 ( 见第 3.2 节步骤 2 ) 转到组织中。下面的参数是按照标准设置的（见注 41) 。距离 2.5 cm（破裂盘到载体膜之间距离），阻挡板孔径 0.8 cm （载体膜到终止屏之间的距离），目标距离

操作方法所属实验：基因枪法转化小麦实验