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问答
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问
实时荧光定量PCR
反应
dxy_gwrp7ndq
两步法，三步法并没有本质区别，信号的读取都是在每一个延长结束后读取。定量
PCR
一开始的时候也是三步法的。两步法，是因为设计引物的时候把退火温度设为酶的工作温度，而且定量
PCR
的产物都很短，需要的时候都短，所以两步法更方便。三步法的话，花的时间长，不利于快速实验。
2 回答
853 围观
问
实时荧光定量PCR
扩增曲线平台期上扬是为什么？
loveliufudan
实时荧光定量PCR
扩增曲线平台期上扬可能由以下几个原因引起：
PCR
反应物质不足：如果
PCR
反应体系中模板DNA、引物、探针或dNTP等的浓度不足，会导致
PCR
反应速率降低，扩增曲线出现平台期上扬现象。初始DNA浓度过高：在
PCR
反应开始时，如果DNA模板的浓度过高，可能会在早期扩增时产生大量产物，导致引物和其他反应物质过早耗尽，使得
PCR
扩增速率降低，从而形成平台期上扬。
PCR
反应物质质量差：如果
PCR
反应物质的质量存在问题，例如引物或探针的污染或降解，dNTP的失活或者
PCR
反应体系存在抑制
2 回答
1655 围观
问
实时荧光定量PCR
测细菌耐药基因，内标物怎么设计
4442 围观
问
real time
实时荧光定量PCR
bamboopiggy
用可以加384孔板的电动移液的排枪，且在加样前设计好加样的位置，可以用于384孔板上样的白枪尖，每个枪尖对应孔板的一个位置。
3 回答
461 围观
问
实时荧光定量PCR
条件摸索
balalaLy
cDNA稀释倍数不用太纠结，一般都是按照1：10或者1：20这样稀释，如果需要做的基因数量不是很多，就按1：10，最好按照固定的比例，比如逆转录用500ng或者1000ng的总RNA，然后用1：10这样的比例稀释cDNA,这样你不同批次的实验之间进行对比也比较合理
4 回答
971 围观
问
实时荧光定量PCR
进行HRM曲线进行分析HRM的温度条件应该如何诱导异源双链的发生？
bamboopiggy
hrm分析只是能识别出有样本中异源双链，而不是产生异源双链
2 回答
463 围观
问
（
实时荧光定量PCR
）非竞争性内标定量中间的公式（从CT值到浓度）是怎么确定的？怎么建立模型？
loveliufudan
在
实时荧光定量PCR
中，常用的非竞争性内标法是采用外源性参比基因或人工合成的内标分子作为定量的基准，通过比较参考基因和目标基因的荧光信号差异，计算出目标基因的相对表达量。具体的公式和建模方法如下：1.构建标准曲线首先，需要在实验中构建一个标准曲线，将已知浓度的DNA模板进行反转录合成cDNA，然后进行
实时荧光定量PCR
，测量荧光信号与初始DNA浓度的对数之间的关系。根据标准曲线，可以通过计算目标基因和参考基因的CT值差异，得出目标基因的相对表达量。2.计算相对表达量根据
实时荧光定量PCR
的数据
2 回答
601 围观
问
实时荧光定量PCR
为什么模板浓度高了反而CT值增大了？
土井挞克树
可能是扩增效率低的原因，提高扩增效率
4 回答
921 围观
问
实时荧光定量PCR
的引物能不能用来做RT
dxy_j7jezao0
下游引物可以，这就是RT中所说的特异引物
5 回答
295 围观
问
TaqMan荧光
PCR
检测技术和
实时荧光定量PCR
技术的区别？
bamboopiggy
taq探针法，除了要设计普通的
实时荧光pcr
的引物之外,还要设计一条与探针结合的引物。taq探针法精度更高一些，但是普通实验的话，用
实时
荧光法就好，更方便一些。
3 回答
535 围观
问
【求助】
实时荧光定量PCR
内参基因溶解曲线问题
bamboopiggy
高度不是问题，只要起峰的位置一致就可以。
4 回答
689 围观
问
在做
实时荧光定量PCR
时扩增效率低是怎么回事儿？
灵枢天问
你检查一下你的荧光酶是不是降解了
3 回答
128 围观
问
实时荧光定量PCR
，扩增后进行链熔解曲线基线高且杂峰较多怎么回事？
bamboopiggy
melt curve杂峰多，说明你的primer不特异,有非特异产物的产生
6 回答
560 围观
问
实时荧光定量PCR
仪中的多通道指什么，有什么用？ 每个通道怎么都有颜色标记？
juyue2010
可以同时检测多个目的片段，进行多重
PCR
,一般使用探针法qPCR,每种探针标记一个颜色。一个通道检测一个颜色，互不干扰
3 回答
1128 围观
问
请问做
实时荧光定量PCR
实验时，为什么做标准曲线？可以不做标曲吗？实验新手，求指导！
迟C迟
做标曲才可以算出这对引物的扩增效率（其斜率），方便用pfaffl方法来进行相对定量（得到的结果相对精确一点），否则只能默认扩增效率为2，用2^-ddCt(Livak)法来计算，做标曲才可以绝对定量。
3 回答
1061 围观
问
实时荧光定量pcr
同一个引物，不同时期的四个样品，三个合适，一个有杂峰，是什么原因
loveliufudan
可能的原因有以下几个：样品制备不同：不同制备方法可能导致样品中出现不同的杂质，影响
实时
荧光定量的准确性。因此，应尽可能使用相同的制备方法来制备样品，以减少可能的差异。样品质量差异：如果样品质量存在差异，例如某个样品受到了污染或者存在一些异常情况，就可能导致杂峰的出现。这种情况下，需要重新制备样品或者进行进一步的处理。仪器问题：
实时
荧光定量是一种非常敏感的技术，如果仪器存在问题或者使用不当，就可能出现杂峰。例如，可能存在污染或者存在一些操作失误，需要检查仪器并排除故障。数据处理问题：在数据
4 回答
629 围观
问
实时荧光定量PCR
扩人的线粒体基因设计引物 进行个体识别是不是要分段设计引物？
汤姆卜丽波
肯定要分段的，基因太长了，要针对每一段设计
3 回答
325 围观
问
在做
实时荧光定量PCR
中的基因分型，在扩增体系中加入石蜡油和甘油有什么样的好处？
bamboopiggy
加入石蜡油是起封闭左右，防止液体挥发，现在很少用了
5 回答
1300 围观
问
Pcr
曲线异常
秋秋欣欣
看起来像是环境有污染，换台仪器试一下呢
2 回答
445 围观
问
我在做
实时荧光定量PCR
的时候，我是先设定好样品和目标名称，一共两个目标基因，两个内参。但是我跑完就变成一个内参，其中一个内参
bamboopiggy
可能是你设置的问题，一般的
realtime pcr
仪都可以在跑完后，设置样品和目标名称的。
3 回答
188 围观
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