实时荧光定量PCR，扩增后进行链熔解曲线基线高且杂峰较多怎么回事？

melt curve杂峰多，说明你的primer不特异,有非特异产物的产生

扩增后链溶解曲线杂峰较多考虑引物特异性问题，可以重新设计引物序列试验。

CT值多大？如果样品浓度太少的话会出现菲特异性扩增。或者是会不会样品降解了！

可能有以下原因：

1）非特异性扩增：主要原因为引物特异性不好、Tm值较低或模板质量不高，可以根据设计原则设计新引物或者通过梯度 PCR 对引物退火温度（Tm值）进行优化，上调Tm值，选购质量较好的离心柱法核酸提取试剂，提高核酸提取质量，等等。

2）引物二聚体 可通过琼脂糖凝胶电泳确认引物二聚体。引物二聚体在凝胶的底部形成扩散条带，通常位于100 bp以下。

引物设计不够优化

--与阴性对照的熔解曲线比对可判断是引物二聚体或是非特异性扩增的影响。相应的调整引物设计，避免引物二聚体、发夹结构或非特异性扩增的出现。

引物浓度不佳

--适当降低引物的浓度（200-250 nM为宜），并注意上下游引物的浓度配比。

镁离子浓度过高

--适当降低镁离子浓度，或选择更合适的预混试剂盒。

模板有基因组的污染

--适当降低镁离子浓度，或选择更合适的预混试剂盒。

非特异性扩增：主要原因为引物特异性不好、Tm值较低或模板质量不高，可以根据设计原则设计新引物或者通过梯度 PCR 对引物退火温度（Tm值）进行优化，上调Tm值，选购质量较好的离心柱法核酸提取试剂，提高核酸提取质量，等等。