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悬浮细胞克隆的分离
加样枪或 Pasteur 吸管吸取集落,移至培养瓶或多孔板的培养孔中。
实验概况收录 1 操作方法 · 1 相关问答 · 3 相关文章
方案14.8 悬浮细胞克隆的分离
1. 用倒置显微镜观察培养皿中的细胞,用毡制粗头笔或 Nikon 标记笔标记出集落。2. 24 孔板的每一孔中加 1 ml 培养基。3. 解剖显微镜(20~50× 放大)下挑取集落(a)每一个细胞集落用一个枪头(加样枪上的黄色枪头)。(b)将移液器调至 100 μl。(c)先用枪头吸大约 50 μl 的培养基,将该枪头对准要分离的集落,在集落内轻轻吸取剩余的 50 μl。4. 将吸取物移至 24 孔板,用培养基冲洗集落,如果培养基中含美希索,集落就会固定、黏附,然后生长;如果培养基含有琼脂
操作方法所属实验:悬浮细胞克隆的分离
藻酸盐包裹实验
1. 将藻酸钠溶于无菌生理盐水,终浓度为1.5%; 2. 收集培养的肿瘤细胞,用无血清的培养基洗涤1 次,将细胞沉淀重悬于1.5%藻酸钠溶液中; 3. 将上述肿瘤细胞悬浮液用1 ml 加样枪缓慢滴入磁力搅拌的250 mM CaCl2 溶液中,形成乳白色的藻酸盐小珠。继续静置于250 mM CaCl2 中30 min 即可使用。以上操作步骤均在无菌条件下进行; 4. 将第4 次免疫后7 天的小鼠用苯巴比妥钠0.1ml (按100 mg/kg 计) 腹腔注射麻醉,小鼠麻醉后置于解剖台上,切开背部
操作方法所属实验:藻酸盐包裹实验
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【求助】修理微量加样枪

kfh2008 求助,请问,微量加样枪量程那里的三个数字不在同一个直线上,总是对不齐,怎么样才能调回正常。谢谢。 dlzhangyu 要看你的牌子是什么,一般都附有一个小的塑料扳手用来调整。Eppendorf和Gilson的好像没有,他们的枪直接送修即可,他们有这项服务的。 sakingoow 请问德国eppendorf如何送修呢,怎么找不到联系方式啊 kfh2008

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从“加样枪的使用”看医学实验室的质量管理

  在医学实验室现场评审中,评审专家观察一位检验技术员正在使用加样枪进行血液样品定量操作。   评审专家向技术员提问:“如果你正在操作血液样本的定量加样枪不小心掉到了地上,你该如何处理?”   该技术员思索片刻回答道:“如果加样枪不小心掉在地上,我首先想到的必须从员工生物安全和实验室质量保证两方面着手进行处理:   其一,在生物安全方面:对溅出来的血液,按照实验室生物安全有关污染物或污染区的处理要求对受污染的物品或区域进行消毒清洁,保证实验室人员的人身

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聚丙烯酰胺凝胶电泳法
。(2)在小烧杯中按以下比例配好浓缩胶( 充分混合好) 将小烧杯中的浓缩胶沿着高玻璃一边缓缓地倒入玻璃板中已凝聚好的分离胶上, 直到离玻璃板顶端5~10 mm 时, 插入梳子,约15~20 min 待胶凝固后, 小心地取出梳子, 即可见多个样品槽。 4.  加样、电泳 (1)用大烧杯取800 ml 电极缓冲液加到电泳槽中, 电极缓冲液盖住矮玻璃, 接上电源, 电压调到50 V, 用100 μl 加样枪取10~30 μl 样品加入到样品槽中。(2)将电压调到100 V, 等到溴酚蓝走过浓缩胶后, 将电压调到
操作方法所属实验:常规蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳实验
细胞冻存和复苏
一、材料准备1.  仪器:净化工作台、 离心机、恒温水浴箱、冰箱(4℃、-20℃、-70℃)、倒置相差显微镜、培养箱、液氮冰箱。 2.  玻璃器皿:吸管(弯头、直头)、 培养瓶、玻璃瓶(250ml、100ml)、废液缸。 3.  塑料器皿: 吸头、枪头、胶塞、移液管(10ml)、15ml离心管、冻存管(1~2ml)。 4.  其他物品:微量加样枪、红血球计数板、记号笔、医用橡皮膏、移液枪。 5.  试剂:D-Hanks液、小牛血清、培养液、双抗(青霉素、链霉素)、胰蛋白酶(0.08
操作方法所属实验:细胞冻存和复苏实验
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从“加样枪的使用”看医学实验室的质量管理

  在医学实验室现场评审中,评审专家观察一位检验技术员正在使用加样枪进行血液样品定量操作。 评审专家向技术员提问:“如果你正在操作血液样本的定量加样枪不小心掉到了地上,你该如何处理?”     该技术员思索片刻回答道:“如果加样枪不小心掉在地上,我首先想到的必须从员工生物安全和实验室质量保证两方面着手进行处理:     其一,在生物安全方面:对溅出来的血液,按照实验室生物安全有关污染物或污染区的处理要求对受污染的物品或区域

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PCR拖尾及假阳性的原因及对策

应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外; 2.除酶及不能耐高温的物质外,所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管 及加样枪头等均应一次性使用。 3.各种试剂最好先进行分装,然后低温贮

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抗体的生物素化标记
Solution B(50:1)配制适量 BCA 工作液,充分混匀。(4)各孔加入 200 μL BCA 工作液,用加样枪轻轻吹打混匀,37 ℃ 恒温箱放置 30 min。(5)冷却至室温后,用酶标仪测定 A562。(6)根据结果绘制标准曲线并计算出样品中蛋白浓度。
操作方法所属实验:抗体标记
胰酶消化法
冲洗1遍。 4.  用眼科弯剪将肺组织剪碎成1 mm3大小,加入含有双抗的PBS,将肺组织块吹打开,静置15 min后,更换新的PBS。 5.  用200 ul微量加样器(最好是超净台中专用的,临用时用酒精绵球好好擦拭枪柄)取200 ul加样枪头一个,剪去尖,在酒精灯上用火焰烧弯。用枪头吸取组织块接种于培养瓶中,每瓶20-25块左右,每小块间距0.5 cm左右。组织块放置好后,轻轻将培养瓶翻转,让瓶底朝上,向瓶内加入2 ml左右的培养液,盖好瓶盖,将培养瓶倾斜放置在温箱中,干贴壁2-4 h
操作方法所属实验:大鼠肺成纤维细胞原代培养实验
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多克隆抗体的免疫电泳技术

);蒸馏水;烧杯(400-600ml);加样枪(5-100μl)。 实验步骤   1. 准备琼脂糖凝胶 将琼脂和电泳缓冲溶液混合放入90℃水浴加热至溶化,制成1%琼脂,将琼脂在冷却前铺在水平玻璃板上,待冷却至室温后,按图用内径4毫米的打孔器打孔及制作凹槽。 2. 电泳 将用电泳缓冲溶液稀释的4%-5%的抗原用滴管小心放入小孔中,将胶板放入电泳槽中并用润湿的滤纸将胶板和电泳槽中的缓冲溶液相连。盖上电泳

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PCR拖尾及假阳性的原因及对策

 5.适当降低dNTP和镁离子的浓度   6.减少循环次数  假阳性   现象 :空白对照出现目的扩增产物   原因 :   靶序列或扩增产物的交叉污染   对策 :   1.操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外;   2.除酶及不能耐高温的物质外,所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管   及加样枪头等均应一次性使用。   3.各种试剂最好先进行分装

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酶联免疫斑点实验(ELIspot)
一、PVDF-底的免疫斑点板或者平底的酶标板 ELISpot技术要点  1.  操作BCIP/NBT显色液时最好戴上手套。 2.  为了防止边缘影响,最好在96孔扳外面包裹锡箔膜,包裹直到显色结束再弃去。 3.  加样细胞和试剂时加样枪头千万不能碰触孔底的PVDF膜,以防止损坏PVDF膜。 4.  常用的96孔扳虽然不是无菌的,但是短暂的孵育时间和培养液中抗生素的存在,ELISpot的操作过程不会有污染的麻烦。 5.  绝大部分板子只能一次做完,请务必在实验开始之前设计好实验方案,尽量最大
操作方法所属实验:酶联免疫斑点实验 (ELIspot)
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