dxy_hndmvol9
铺了六孔板之后第二天转染siRNA,转染前镜下观察细胞分布均匀,转染之后再看,每个孔靠近中间位置都有一块儿呈细胞缺失,但也没有看到漂浮的死细胞。加转染试剂时是一滴一滴加的,不知道缺失的细胞是换液时被弃去了,还是转染试剂导致的,还是因为用的加样枪冲击力大导致的(转染试剂每孔是250微升,用的1毫升的枪加的)转染试剂用的是opti-MEM和lipo-3000。想请问有遇到过类似情况的吗,有什么解决办法
申东熙老伯
中间一整块都没有细胞可能是换液是枪头吸了培养基直接打在上面了,可以从六孔板的壁上加培养基以及转染复合物,加了之后摇匀就可以了。
loveliufudan
有几个可能的解释和解决办法:
1. 液体置换:由于您在转染过程中是一滴一滴加转染试剂,有可能在液体置换过程中,部分细胞被弃去或流失。为了减少这种情况的发生,您可以尽量轻柔地进行转染试剂的加入,避免强烈的液体流动和对细胞层的冲击。
2. 转染试剂浓度和时间优化:有时候,转染试剂的浓度或作用时间可能对细胞产生毒性影响,导致细胞缺失的现象。您可以尝试优化转染试剂的浓度和作用时间,减少对细胞的不良影响。
3. 优化细胞密度和均匀性:确保在进行转染前,细胞的密度和分布均匀。如果细胞密度太高,可能会导致细胞层中心区域的营养和氧气不足,从而导致细胞死亡或缺失。在铺孔板之前,可以使用显微镜确保细胞的均匀分布。
4. 转染工具优化:如果使用的加样枪对细胞层施加了较大的冲击力,可能会导致细胞脱落或损伤。您可以尝试使用更柔软的转染工具,如微量移液器,减少对细胞的机械性损伤。
土井挞克树
缺失的部分应该是冲洗时候被冲掉了,建议操作时候轻柔一些,避免机械损伤
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