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简介
转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing,PTGS)被称为RNA干扰(RNAi),与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链 RNA(dsRNA)导入细胞,可以使mRNA发生特异性的降解,导致其相应的基因沉默。
目前为止较为常用的制备 siRNA的方法有化学合成、体外转录、长片段dsR-NA经RNA酶I类降解(如Dicer,E.coli的RNA酶II)体外制备 siRNA,以及通过 siRNA 表达载体或者病毒载体、PCR制备的siRNA表达框在细胞中表达产生siRNA。
前面的3种方法主要都是体外制备siRNA,并且需要专门的RNA转染试剂将 siRNA转到细胞内。
而采用siRNA表达载体和基于PCR的表达框架则属于从转染到细胞的DNA模板中在体内转录得到siRNA。
这两种方法的优点在于不需要直接操作RNA。
原理
来源:丁香实验团队
操作方法
转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing,PTGS)被称为RNA干扰(RNAi),与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链 RNA(dsRNA)导入细胞,可以使mRNA发生特异性的降解,导致其相应的基因沉默。目前为止较为常用的制备 siRNA的方法有化学合成、体外转录、长片段dsR-NA经RNA酶I类降解(如Dicer,E.coli的RNA
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