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siRNA转染后,基因反而上调

相关实验:RNA 干扰技术

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cinco呀

我买了吉玛的三保一siRNA,转染后跑了三个siRNA的qpcr,结果不仅没沉默,反而全部上调了,有没有大神知道是怎么一回事啊?NC组和空白组差异不显著,管家基因的CT值从17左右上升到19左右,转染后24h收的样,求求大神指点迷津啊

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4 个回答

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dxy_8nqn3sh7

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我也是,同一个公司购买的干扰。转染反而上调了。

 

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bamboopiggy

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1试试转染后48h收样,24h时间有点短 2注意一下你的qpcr的引物的melt curve是否是单峰

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huarenqiang5

有帮助

应该是转染效率太低了,转染效率低导致进入细胞的siRNA比较少,刺激细胞产生应激反应,导致目的基因不降反而升高,转染效率高的话就没事了。

PS:如果转染效率很好,但没有干扰,是序列不行,要换干扰序列。

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loveliufudan

有帮助

三个SiRNA全部上调可能是由于转染的SiRNA浓度过高,导致了细胞的非特异性反应。另外,还有可能是您的qPCR实验出现了技术问题。建议您重新检查SiRNA的浓度和质量,以及优化qPCR实验的条件,例如优化引物浓度和放大条件等。此外,您可以尝试使用其他的SiRNA转染试剂或者其他的SiRNA设计和合成公司。

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