Inhabit
新手小白一枚,请问做RNA干扰实验时,敲减和敲低该怎么选择,shRNA和siRNA两者之间又该如何选择呢?
迟C迟
siRNA和shRNA之间进行选择时,要考虑的一个重要因素是实验时间的长短。 siRNA在细胞中瞬时表达的,通常在3-5天内进行检测,而shRNA可以通过病毒或质粒介导的转染保持稳定。
丁香粉猪猪
如果只是补个数据,果断用siRNA。如果建立起稳定细胞体系以后还有很多实验,建议用shRNA,原代细胞不容易转,而脂质体转染效率不高,所以我很担心您实验的成功率。我建议您换一种转染试剂。我们实验室现在用的是英格恩生物的转染试剂R4000,专门针对RNA转染,原代细胞、悬浮细胞和敏感细胞都可以转,而且他家的试剂是纳米材料的,效果优于脂质体,可以试一下。
原代细胞一般是从活体组织中*的细胞,细胞体系比较复杂,不稳定,原代培养具有两个特点接触抑制和贴壁生长,原代细胞的转染要比一般传代的细胞难很多,BIODAI可以转染siRNA、antisense RNA、microRNA等200bp以内的小分子RNA和DNA。
菲菲飞呀飞
质粒的转染效率跟siRNA类似,不过shRNA被表达出来需要时间,所以效果可能没有siRNA直接快速。
但是shRNA质粒一般含有抗生素选择基因,这就允许你筛选稳定细胞系,不过这个很花时间(1-3个月)
不过一旦稳定细胞系筛选成功,你就再不用做转染实验了,一劳永逸。
所以两者各有所长,要看你的实验性质。
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