PCR拖尾及假阳性的原因及对策

拖尾

　　现象 ：产物在凝胶上呈Smear状态。

　　原因 ：

　　1.模板不纯

　　2.Buffer不合适

　　3.退火温度偏低

　　4.酶量过多

　　5.dNTP、Mg2+浓度偏高

　　6.循环次数过多

　　对策 ：

　　1.纯化模板

　　2.更换Buffer

　　3.适当提高退火温度

　　4.适量用酶

　　5.适当降低dNTP和镁离子的浓度

　　6.减少循环次数　

假阳性

　　现象 ：空白对照出现目的扩增产物

　　原因 ：

　　靶序列或扩增产物的交叉污染

　　对策 ：

　　1.操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外；

　　2.除酶及不能耐高温的物质外，所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管

　　及加样枪头等均应一次性使用。

　　3.各种试剂最好先进行分装，然后低温贮存