请问有做单细胞PCR的大佬吗？我逆转录为cDNA后，设计引物PCR抗体重轻链，但P不出来，拖尾弥散

考虑是样品内存在降解所以才会拖尾这么严重

主要考虑以下几点原因:引物设计不佳、DNA浓度加的太多、mg2+浓度加的太高、跑胶电压不合适、酶的量过大或酶的质量差、退火温度过低、循环次数过多等。

1.

低质量的cDNA：cDNA合成过程中可能存在RNA降解、反转录不完全或反转录过程中引入的污染物等问题，导致cDNA质量不佳，从而影响PCR扩增效果。

2.

PCR反应条件不当：PCR反应条件包括温度、反应时间、引物浓度、酶浓度、缓冲液等，如果这些条件设置不当，可能会影响PCR扩增效果。

3.

引物设计问题：引物的设计可能存在问题，比如引物长度不合适、引物序列中存在不稳定结构、引物与模板匹配度不佳等，都可能导致PCR扩增失败。

考虑一下样本有没有污染，其次样本浓度过低，还有跑的太快没有压好也会拖尾