单细胞PCR

单细胞PCR基本原理是单个细胞中往往含有极少的（少至一个拷贝）目的DNA或RNA,因此，从单个细胞中扩增DNA或 RNA序列需要特定的条件。首先要分离出单个特定细 胞，这可以利用显微操作（适合于细胞形态特征明显 的细胞）或流式细胞技术来实现。

 

分离出单个细胞后, 将细胞裂解，释放出目的DNA或RNA。若分析DNA, 以裂解细胞而不破坏细胞核为宜，然后以裂解产物为模板进行PCR反应。若分析RNA,要先将 RNA反转录成cDNA,然后进行PCR反应。

 

PCR产物可直接进行琼脂糖凝胶电泳，或进一步做点杂交或Southern blot进行分析。

单细胞PCR常用应用领域如下：

1. 单细胞PCR用于单精子的分型

利用单细胞PCR分析单个精子中连锁遗传标记的等位基因岀现的频率，可以计算出相邻基 因标记之间的重组频率，从而推算出连锁遗传标记之间距离，为构建哺乳动物基因组的遗传图谱 提供了一个有力的方法。尤其对那些不能大量繁殖或世代周期格外长的生物，制作这些物种的 遗传图谱，单精子分型显得更为有效。

2. 单细胞PCR运用于淋巴结造血系统疾病的研究

如霍奇金病中里德-斯特恩伯格细胞（RS细胞）的起源研究。由于霍奇金病侵犯的淋 巴结中，肿瘤性成分里德-斯特恩细胞常少于1% ,因而从组织中抽提的DNA实际上是肿瘤 细胞DNA和其它细胞DNA的混合物，故这种抽提方法在检测RS细胞上是不适用的。

 

免疫 组化和原位杂交相结合，可以对单个霍奇金细胞和RS细胞进行基因表达的检测，但不能对 其DNA进行更详细的研究。单个细胞PCR技术弥补了上述不足。

 

Kuppers等从一例患硬化 型霍奇金病的患者中分离出RS细胞，利用单细胞PCR获得了 12个IgH基因重排产物，对 其中8个产物进行的测序分析显示，7个细胞具有完全一致的序列，提示该例患硬化型霍奇 金病的患者中的RS细胞至少有一部分来源于克隆性B细胞。在组织切片上进行单个细胞 分离及PCR,就方法学而言完全具有可行性，对淋巴造血系统病变的研究也是非常适宜的。

 

单细胞研究还可被运用于淋巴结生发中心及其它类型恶性淋巴瘤的研究，因为只有通过单细 胞研究，才能获得有关克隆相关性、克隆内差异和延续突变的信息。该方法加以改进还可用 于其它各种肿瘤，尤其可用于对肿瘤细胞之间混有大量非肿瘤细胞的样品进行癌基因和抑癌 基因的分析，以及肿瘤细胞的克隆性研究。