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单细胞CMC试验

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1.用细胞培养液等量混合效应细胞和靶细胞,30℃水浴10分钟。室温中250×g离心5分钟,去上清液。同量靶细胞不加效应细胞同样处理作为对照。
2.用少量细胞培养液轻轻悬浮细胞,吸管上下吹打5~6次。这一分散细胞的步骤关系到试验的准确性和重复性,应当设法保持技术的一致性。取少许细胞悬液,稀释后直接在显微镜下计数效应细胞和靶细胞的结合率,即平均每100各淋巴细胞中结合了靶细胞的效应细胞的数目。
3.其余的细胞悬液与等量液态(37℃)的0.5%低熔点琼脂糖混合均匀,铺在培养皿中,厚度≤2mm。固化后小心加入适量细胞培养液覆盖琼脂糖层,置37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养1~4小时。
4.吸去培养液,加入适量0.1%台盼蓝覆盖琼脂糖层,室温染色5分钟。吸去染色液,加入适量0.2%甲醛覆盖琼脂糖层,室温固定5分钟。
5.在显微镜下死亡细胞呈蓝色,计数靶细胞的死亡率。靶细胞的自发死亡率可以从经同样处理的靶细胞对照培养皿中测得。如区分效应细胞和靶细胞有困难,可以用双醋酸荧光素染色加以区分。镜下计数。

 

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