原理
用加样枪或 Pasteur 吸管吸取集落,移至培养瓶或多孔板的培养孔中。
材料与仪器
生长培养基 多孔板 培养瓶 解剖显微镜 移液器 粗头笔 黄色枪头
步骤
1. 用倒置显微镜观察培养皿中的细胞,用毡制粗头笔或 Nikon 标记笔标记出集落。
2. 24 孔板的每一孔中加 1 ml 培养基。
3. 解剖显微镜(20~50× 放大)下挑取集落
(a)每一个细胞集落用一个枪头(加样枪上的黄色枪头)。
(b)将移液器调至 100 μl。
(c)先用枪头吸大约 50 μl 的培养基,将该枪头对准要分离的集落,在集落内轻轻吸取剩余的 50 μl。
4. 将吸取物移至 24 孔板,用培养基冲洗集落,如果培养基中含美希索,集落就会固定、黏附,然后生长;如果培养基含有琼脂,则需用吸管在培养孔内上下吹吸集落几次,分散琼脂。细胞克隆也可以直接移至竖直放置的 25 cm2 的塑料培养瓶中。
2. 24 孔板的每一孔中加 1 ml 培养基。
3. 解剖显微镜(20~50× 放大)下挑取集落
(a)每一个细胞集落用一个枪头(加样枪上的黄色枪头)。
(b)将移液器调至 100 μl。
(c)先用枪头吸大约 50 μl 的培养基,将该枪头对准要分离的集落,在集落内轻轻吸取剩余的 50 μl。
4. 将吸取物移至 24 孔板,用培养基冲洗集落,如果培养基中含美希索,集落就会固定、黏附,然后生长;如果培养基含有琼脂,则需用吸管在培养孔内上下吹吸集落几次,分散琼脂。细胞克隆也可以直接移至竖直放置的 25 cm2 的塑料培养瓶中。
来源:丁香实验