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冻存细胞的复苏

冻存细胞的复苏可以用于：（1）在细胞的实验操作中，冻存的细胞要进行复苏，再培养传代。（2）持久地保留细胞系

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MSCs 培养物的扩增和冻存实验

缩小细胞培养体积试验证明，MSCs最好培养于直径15cm的Nunclon或Corning板中，面积在140cm2和150cm2之间。细胞产率取决于培养皿的数量，一般使用此方法传代，每个培养皿中可收获5X105个细胞。来源：《人干细胞培养》

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DPSCs的冻存

(a)用PBSA洗培养瓶/皿三次。(b)加足够的胰蛋白酶-EDTA溶液，37℃孵育。(c)在80%的贴壁细胞从培养表面脱离时，加人MSC培养基。(d)500g离心6min。(e)倒掉上清，用冰上预冷的冻存液I重悬细胞。(f)细胞计数，然后稀释或浓缩细胞到终浓度的2倍。继续将装有细胞的试管放置在冰上。(g)在冰上边转动试管边缓慢加人等体积的冻存液II。(h)等量按份加人冻存管。(i)将冻存管放入程控降温仪。慢速冷冻盒和-80℃冰箱也可用于降低冷却速度。将冻存管放人液氮长期储存。

操作方法所属实验：牙髓干细胞 DPSCs 的冻存与复苏

CB-MNCs冻存

(a)准备冻存液：90%FBS+10%DMSO;放冰上或4℃冰箱冷却，至少30min。(b)CB-MNCs细胞计数。(c)用冷的冻存液重悬细胞，调整细胞浓度为（5〜l0) ×106活细胞/mL。(d)按1mL/冻存管分装。(e)立即将冻存管放入慢速冷冻盒，置于-70℃冰箱4〜24h。或者将冻存管放入液氮的控速降温仪中。(f)4〜24h后，将置于-70℃冰箱或控速降温仪中的冻存管放入耐液氮储存盒，将此盒放入液氮罐的气相（大约-135℃)或液相（大约-196℃）中。

操作方法所属实验：脐血来源多能祖细胞（CB-MNCs）的冻存与复苏实验

问冻存组织如何解冻

fountain571

冻存的组织解冻后一般对微结构都有损伤如果后期再固定做组化的话不好

实验问答1 回答2721 围观

问PBMC可以冻存吗？冻存方法和条件是什么呢？

芝士真好吃

可以冻存，我的方法是用10%的DMSO+90%的自体血清

实验问答5 回答5384 围观

冻存和复苏

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细胞传代和冻存

如果您在培养细胞，不知怎样传代才能让细胞健康生长，面对纷杂的解离试剂不知如何选择，或者想冻存高质量的细胞，本节课里，Dr. 赛将会带来详细介绍。

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冻存活检组织实验

通常难以利用较大的活检标本和由其提供的一切有价值的材料。在这些情况下，可通过冷冻保存组织。来源：动物细胞培养：基础技术指南第五版

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复苏冻存细胞实验

快速复苏细胞，缓慢稀释，以高细胞密度重新接种来源：动物细胞培养：基础技术指南第五版

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细胞的冻存

1) 吸干已长满细胞的细胞瓶内培养液。细胞不应在高密度状态下冻存，并应在冻存的 24 小时内换液。2) 加 2 ml 胰蛋白酶（T-25 细胞培养瓶）处理细胞。3) 让液体在细胞表面来回流动 4~5 次。4) 吸干胰蛋白酶液。5) 重复步骤 3 和 4。6) 置 37°C 3~5 分钟。7) 将细胞从细胞培养瓶表面洗下，重悬细胞于 3~5 ml 培养液中。8) 离心，200 g，5 分钟；重悬沉淀于 1 ml 冻存液中。冻存液细胞生长培养液（RPMI,DMEM 等） 7 mlFBS

操作方法所属实验：细胞的冻存

DPSCs冻存后复苏

(a)将冻存管放入37℃水浴，快速溶化（1〜2 min)对最好的复苏效果很重要。(b)加足够体积的MSC培养基，充分混匀。(c)500g离心6 min。(d)倒掉上清，将细胞重悬于MSC培养基中。(e)用台盼蓝染色，进行活细胞计数，然后按需要的细胞密度接种。(f)在MSC培养基，37℃和5% CO2的培养箱中培养

操作方法所属实验：牙髓干细胞 DPSCs 的冻存与复苏

问冻存后的脐带复苏成活率很差

凌晨三点Dxy

液氮中冻存的脐带细胞，复苏后成活率差的原因可能有以下几点：1. 冷冻和解冻过程中损伤：在液氮中冻存时，脐带细胞可能会受到冷冻和解冻过程中的损伤。这种损伤可能导致细胞膜破裂、蛋白质变性等现象，从而影响细胞的活性和功能。2. 细胞质量问题：如果脐带血中的造血干细胞本身存在质量问题，如数量不足、活性低下等，那么在冻存过程中可能会受到更大的影响，导致复苏后成活率差。3. 复苏方法不当：复苏时使用的离心管、培养基等设备或试剂可能存在污染或质量问题，或者复苏方法不正确，如温度、时间等控制不当，都可能

实验问答2 回答347 围观

问那怎么样冻存细胞才能保证细胞能正常复苏，不至于冻存死亡呢？

麻黄连翘赤小豆

在冻存过程中减少冰晶的产生，这样细胞就不会刺破，根据这个目的进行冻存方法的改进。有些细胞是95血清5培养基，还有现成的冻存液都是可以用

实验问答4 回答595 围观

原代细胞冻存技术

原代细胞冻存技术：1、选用生长情况好，数量较多的原代细胞，冻存前一天换液一次。2、贴壁细胞需用0.25％胰酶常规消化将细胞消化下来，将细胞悬液收集至离心管中。3、1000rpm离心5分钟，弃上清液。4、沉淀加含DMSO的培养液，计数，调整至（1-10）×106 /ml。5、将悬液分至冻存管中，每管1 ml。6、密封冻存管，封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。7、用记号笔标明细胞种类，冻存日期。8、按下列顺序降温：室温→4℃（20分钟〕→冰箱冷冻室（30分钟）→超低温冰箱（－80℃过夜）→液氮。

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冻存细胞到货后如何处理及复苏？

本期主要内容是：客户在北纳生物购买冻存细胞，到货后如何处理及复苏？以下是研发中心老师的几点方法，供大家参考。一、收到冻存细胞怎么处理 1.收到冻存细胞后，请打开包装箱 2.检查箱内干冰是否充足，冻存管是否融化 3.若已经融化，请拍照留存，并于24h内联系客服 4.若无异常，请及时将冻存管置于超低温冰箱内保存 5.若长时间不使用，必须在超低温冰箱内过夜后转移至液氮中保存二、冻存细胞复苏 1.100mm培养皿做好标记 2.加入预热好的12ml完全培养基 3.将冻存管放入37℃水浴锅中，轻轻

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细胞冻存和复苏实验

细胞冻存和复苏可以：（1）用于生物学保种；（2）用于医学上干细胞研究；（3）用于传代培养。

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牙髓干细胞 DPSCs 的冻存与复苏

来源：《人干细胞培养》

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原代MEF的分离和冻存

1. 准备下列试剂和材料：确定怀孕期的母鼠（孕期14至6天）无菌解剖器械（镊子、剪刀、手术刀片）Cellector 带收集装置的不锈钢滤网，1 mm 直径筛网内有搅拌棒的 125 ml 无菌的胰蛋白酶消化的烧瓶有搅拌盘的培养箱无 Ca2+ 和 Mg2+ 的 PBS胰蛋白酶溶液DNase 溶液（10 mg/ml）MEF 生长培养基MEF 冻存培养基150 mm 和 100 mm 组织培养皿2 ml 冷冻管2. 杀死怀孕 14~16 天的母鼠，取出子宫，放在盛有 PBS 的 100 mm 组织

操作方法所属实验：小鼠胚成纤维细胞的培养和体外分化