原理
材料与仪器
牙髓组织
灭菌PBSA 用冰预冷的冻存液I 用冰预冷的冻存液II 胰蛋白酶-EDTA溶液:0.05%胰蛋白酶 0.54mmol L(0.2%)EDTA 无Ca2+和Mg2+的Hank’s平衡盐溶液溶解
1.8mL冻存管
灭菌PBSA 用冰预冷的冻存液I 用冰预冷的冻存液II 胰蛋白酶-EDTA溶液:0.05%胰蛋白酶 0.54mmol L(0.2%)EDTA 无Ca2+和Mg2+的Hank’s平衡盐溶液溶解
1.8mL冻存管
步骤
(a)用PBSA洗培养瓶/皿三次。
(b)加足够的胰蛋白酶-EDTA溶液,37℃孵育。
(c)在80%的贴壁细胞从培养表面脱离时,加人MSC培养基。
(d)500g离心6min。
(e)倒掉上清,用冰上预冷的冻存液I重悬细胞。
(f)细胞计数,然后稀释或浓缩细胞到终浓度的2倍。继续将装有细胞的试管放置在冰上。
(g)在冰上边转动试管边缓慢加人等体积的冻存液II。
(h)等量按份加人冻存管。
(i)将冻存管放入程控降温仪。慢速冷冻盒和-80℃冰箱也可用于降低冷却速度。将冻存管放人液氮长期储存。
来源:丁香实验