冻存后的脐带复苏成活率很差

液氮中冻存的脐带细胞，复苏后成活率差的原因可能有以下几点：

1. 冷冻和解冻过程中损伤：在液氮中冻存时，脐带细胞可能会受到冷冻和解冻过程中的损伤。这种损伤可能导致细胞膜破裂、蛋白质变性等现象，从而影响细胞的活性和功能。

2. 细胞质量问题：如果脐带血中的造血干细胞本身存在质量问题，如数量不足、活性低下等，那么在冻存过程中可能会受到更大的影响，导致复苏后成活率差。

3. 复苏方法不当：复苏时使用的离心管、培养基等设备或试剂可能存在污染或质量问题，或者复苏方法不正确，如温度、时间等控制不当，都可能导致细胞受损或死亡。

4. 存储时间过长：虽然液氮可以长期保存细胞，但如果存储时间过长，可能会导致细胞老化、功能下降等问题，从而影响复苏后的成活率。

可能有以下几个常见问题:

1.融化速度问题

脐带细胞在-196°C的极低温下很容易受到低温冷冻损伤。融化过程中如果速度过慢,细胞会在一个温度范围停留较长时间,这个温度范围正是对细胞最为危险的。因此通常建议将细胞快速转移至37°C水浴中迅速融化。您提到2min都无法完全融化,说明融化速率过慢,可能是水浴温度没有足够高。

2.离心洗涤导致细胞损伤

有些操作流程会在细胞融化后立即离心洗涤,去除细胞冻存保护剂。如果离心力过大或细胞团聚,可能会导致机械性损伤,降低存活率。

3.复苏培养基不合适

复苏后的细胞很脆弱,需要一个友善的环境恢复。如果所用培养基的渗透压、pH、营养成分等不合适,细胞很难存活。