脐血来源多能前体细胞的分离

(a)分离和制备脐血来源的MNCs。

(b)如果使用冻存的CB-MNCs,复苏的细胞可以用于培养，不需要其他分离步骤。

(c)细胞复苏后在30 min内，用台盼蓝染色进行活细胞计数。

(d)将在培养基中的CB-MNCs接种到T25培养瓶中，接种密度为3×10⁵个细胞/cm2。

(e)将细胞在37℃，5% CO₂的条件下培养，每7天更换一次培养基，连续培养2〜4周。

(f)去除培养基，用PBSA洗两次培养瓶(g)用0.05%胰蛋白酶/EDTA处理，使贴壁细胞重悬，按1×10⁶个细胞/瓶的密度重新接种。

(h)细胞生长达到汇合后，按1:3稀释后重新接种，在相同的培养条件下继续培养。

(i)在培养过程中，用台盼蓝染色进行细胞计数，估计总细胞数