非限制性体干细胞（unrestricted somatic stem cells，USSCs)的分离

(a)制备和分离脐带血来源的MNCs(CB-MNCs)。

(b)如果使用冻存的CB-MNCs,复苏的细胞可以用于培养，不需要其他分离步骤。

(c)用起始培养基按5×10⁶〜7×10⁶个细胞/mL浓度接种到T25的培养瓶中。

(d)将细胞在37℃，5% CO₂的条件下培养，2〜4周内每周一次更换培养基和细胞因子。

(e)形成USSC集落后，在扩增培养基中扩增细胞。

(f)将细胞在37℃,5% CO₂的条件下培养。

(g)到达80%汇合后，用0.05%胰蛋白酶/EDTA消化细胞，并按1:3比例传代，在相同培养条件下继续培养。