脐血脐带中干细胞分离实验

实验分类：

细胞实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

来源：《人干细胞培养》

来源：丁香实验

操作方法

非限制性体干细胞（unrestricted somatic stem cells，USSCs)的分离

(a)制备和分离脐带血来源的MNCs(CB-MNCs)。(b)如果使用冻存的CB-MNCs,复苏的细胞可以用于培养，不需要其他分离步骤。(c)用起始培养基按5×106〜7×106个细胞/mL浓度接种到T25的培养瓶中。(d)将细胞在37℃，5% CO2的条件下培养，2〜4周内每周一次更换培养基和细胞因子。(e)形成USSC集落后，在扩增培养基中扩增细胞。(f)将细胞在37℃,5% CO2的条件下培

脐血来源胚胎样干细胞的分离

(a)分离和制备CB-MNCs。(b)根据以下免疫磁珠分选的方法纯化原始系限制性干细胞。(c)用2%HAG处理MNCs，4℃放置20 min。(d)用小鼠抗人CD45,CD33，CD37和抗血型糖蛋白A单克隆抗体标记MNCs，4℃标记30 min。(e)用ACD-A缓冲液洗细胞，400g，4℃离心10 min。(f)用ACD-A缓冲液再洗一遍。(g)用磁珠标记的人IgG4抗总小鼠IgG单克隆抗体标

脐血来源多能前体细胞的分离

(a)分离和制备脐血来源的MNCs。(b)如果使用冻存的CB-MNCs,复苏的细胞可以用于培养，不需要其他分离步骤。(c)细胞复苏后在30 min内，用台盼蓝染色进行活细胞计数。(d)将在培养基中的CB-MNCs接种到T25培养瓶中，接种密度为3×105个细胞/cm2。(e)将细胞在37℃，5% CO2的条件下培养，每7天更换一次培养基，连续培养2〜4周。(f)去除培养基，用PBSA洗两次培养瓶(