脐带内皮细胞的分离
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⑴脐带收集:用无菌止血钳夹闭脐带两端,在止血钳外侧剪断脐带,放入盛有4℃Cord Buffer的饭盒内。脐带在4℃放置不应超过24小时。
⑵ 脐带内皮细胞分离
带无菌手套,取出脐带,在止血钳内侧用碘酒和酒精棉球消毒后,用无菌剪刀将两端脐带剪除。
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在脐带一端找到静脉,插入脐带静脉插管,用2根粗丝线扎牢,用Cord Buffer抽吸有的30ml注射器冲洗静脉腔,至将脐血洗净。
↓
赶出静脉腔内残余液体,将脐带另一端用止血钳夹闭,用10ml注射器连接针头,注入37℃预热的0.1%胶原酶约6-8ml,放入37℃Cord Buffer中保温6-10min
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吸出静脉腔内胶原酶所消化的细胞悬液,加入预加有20mlcordBuffer的离心管中,冲洗静脉腔,一并加入离心管中。
↓
离心,1500rpm,10min弃上清,用5~7ml 20%FCS,RPMT 1640重悬细胞,转入培养瓶,放5%CO2 孵箱
⑵ 脐带内皮细胞分离
带无菌手套,取出脐带,在止血钳内侧用碘酒和酒精棉球消毒后,用无菌剪刀将两端脐带剪除。
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在脐带一端找到静脉,插入脐带静脉插管,用2根粗丝线扎牢,用Cord Buffer抽吸有的30ml注射器冲洗静脉腔,至将脐血洗净。
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赶出静脉腔内残余液体,将脐带另一端用止血钳夹闭,用10ml注射器连接针头,注入37℃预热的0.1%胶原酶约6-8ml,放入37℃Cord Buffer中保温6-10min
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吸出静脉腔内胶原酶所消化的细胞悬液,加入预加有20mlcordBuffer的离心管中,冲洗静脉腔,一并加入离心管中。
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离心,1500rpm,10min弃上清,用5~7ml 20%FCS,RPMT 1640重悬细胞,转入培养瓶,放5%CO2 孵箱