原代细胞冻存技术
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原代细胞冻存技术:
1、选用生长情况好,数量较多的原代细胞,冻存前一天换液一次。
2、贴壁细胞需用0.25%胰酶常规消化将细胞消化下来,将细胞悬液收集至离心管中。
3、1000rpm离心5分钟,弃上清液。
4、沉淀加含DMSO的培养液,计数,调整至(1-10)×106 /ml。
5、将悬液分至冻存管中,每管1 ml。
6、密封冻存管,封口一定要严,否则复苏时易出现爆裂。
7、用记号笔标明细胞种类,冻存日期。
8、按下列顺序降温:室温→4℃(20分钟〕→冰箱冷冻室(30分钟)→超低温冰箱(-80℃过夜)→液氮。