原代细胞提取

存在可能原因:

1、细胞的传代最重要的是胰酶处理时间：消化不够细胞本身就是成团的；若胰酶处理太久，容易造成细胞膜蛋白损伤，使细胞贴壁不紧，显微镜下观察立体感不强，严重的时候甚至会造成细胞死亡。

2、缺少贴壁因子：血清中含有促贴壁因子，而无血清培养基工艺中由于缺少这种促贴壁因子，细胞的贴壁效果会下降很多。

3、支原体或细菌的污染。

4、培养液配置、储存不当，如pH值过碱，Gln量太少等原因。

5、复苏的细胞本身状态不好，已经老化，失去贴附性。

6、接种细胞数目太少，无法分泌足够的细胞外基质。

7、复苏时处理速度太慢，复苏过程不当。

可能是细胞的密度太低了，可以把细胞密度提高试一下

可能是由于以下原因：

细胞密度不够：如果您的细胞密度过低，则它们可能不会附着到培养皿上并开始生长。您可以尝试在培养皿上使用更高密度的细胞进行培养，或者使用细胞贴壁前的显微镜检查细胞的数量。

培养条件不合适：如果您的细胞处于不适宜的培养条件下，则它们可能不会贴附并生长。请确保您的培养基含有足够的营养物质、pH值和温度，以支持细胞生长。此外，您还需要定期更换培养基以去除废弃物和添加新的营养物质。

培养皿不适合细胞：有些细胞对于培养皿的材质和涂层有选择性。您可以尝试使用其他类型的培养皿，或者改变涂层的成分或浓度以促进细胞贴壁。

细胞质量问题：如果您的细胞已经过度老化、受损或污染，则它们可能无法正常贴附和生长。在提取和分离过程中，确保使用高质量的试剂和设备，并在细胞贴壁前进行细胞的活力测试和品质检查。