简介
斑马鱼精子冻存技术，是指将斑马鱼精子和其他物质在 - 196 ℃ 或以下低温保存的一种技术。可以将优秀品系或濒临灭绝的品系长期保存下来，避免因长期养殖、近亲交配造成的种质退化和遗传变异等现象。
原理
斑马鱼精子冻存技术的基本原理是将斑马鱼精子和冻存液在 - 196 ℃ 或以下低温保存。
材料与仪器
器材：
精子冻存需要解剖用具、纸巾、冰盒、冻存管、载玻片、毛细管、Eppendorf 管、锡箔纸
卷成的毛细管帽等。
试剂：
① Tricaine 麻醉剂（400 mg Tricaine 粉末加入 97.9 mL 双蒸水，约 2.1 mol/L Tris（pH=9），调整 pH 到 7，即为 25 × Tricaine 麻醉储剂，通常使用 5 × 或 1 × 溶液）;
② 冻存剂（二甲基酰胺以 10% 体积比溶于胎牛血清，即为冻存液，需新鲜配制）。
步骤
斑马鱼精子冻存技术的基本过程可分为如下几步：
A. 取出待冻存的雄鱼在 Tricaine 工作液中麻醉。待鳃部仅有轻微起伏，取出在鱼水中洗涤，去除残余的 Tricaine；
B. 用纸巾擦干鱼体（特别是泄殖孔处），放置在塑料泡沫上，腹面朝上，用大头针固定（头尾各一枚）。用剪刀从泄殖孔处向前剪开后，再用大头针固定两侧腹部，用镊子拉开内脏，即可见在鱼嫖两侧附着的两个精巢，呈白色品亮状。
C. 用干燥的尖镊轻轻将精巢取出（尽量保持完整），转移到一个装有冻存液的 Eppendorf 管中，用研磨棒研碎。研磨时尽量在冰上操作．以保持精子处于低温状态；
取 7～8 支毛细管放入上述含有精巢匀浆液的 Eppendorf 管中，利用毛细现象吸取精巢匀浆液分装，用锡箱纸卷成的毛细管帽封住下端，立即放入在干冰浴预冷的冷冻管中，每个冷冻管中放 3-4 支毛细管。在干冰浴中冷冻 10-20 分钟后，可将冻存管转移到液氮冻存盒中，再将冻存盒降入液氮罐中冷冻。
常见问题
问题表现：
精子活性
解决方案：
可根据需要选取合适的时间点（例如 1-2 周后或 1-2 个月后），通过人工体外授精的方法复苏精子，检测冻存效果及精子的活性。
来源：丁香实验
