简介
斑马鱼精子复苏技术,是指将冻存的斑马鱼精子在 33℃ 水浴解冻,并尽量减少细胞损伤、激活受精反应。
原理
斑马鱼精子复苏技术的基本原理是将冻存的斑马鱼精子在 33 ℃ 水浴解冻,复苏时速度过慢,细胞内往往重新形成较大冰晶造成细胞损伤。
材料与仪器
步骤
斑马鱼精子复苏技术的基本过程可分为如下几步:
A. 斑马鱼的准备:粘子复苏前一天晚将雌伯和雄鱼各一条隔离放置于配鱼缸中。第二天早晨取走隔板,密切观察行两条鱼追尾几分钟后(注意要在雌鱼产卵之前),取出雌鱼,将全部雌鱼合并放入同一个鱼缸中备用;
B. 从液氮罐中取出需要复苏的精子样品,注意需两人操作,一个人提出冻存架,另一个人取出样品(冻存管)。用尖镊将一支毛细管从冻存管中夹出,交给提冻存架者用手捻融,同时尽快把其他样品(冻存管)放回冻存架,并将冻存架归位、盖上液氮罐;
C. 把融好的精子吹到置于冰水浴中、含有 Hanks 液的 Eppendorf 管中,用移液枪吹吸混匀,置于冰水浴中待用。此时捞出雌鱼,挤压雌鱼腹部获取卵子,用勺子刮下,移液枪吸取稀释的精子滴入勺中(卵上),用 1 ml 移液枪吸取 1 ml 鱼水,将勺中的卵与精子一起冲到培养皿中;
静置 1 分钟左右,待鱼卵外膜鼓起后再加鱼水至培养皿的一半,将培养皿(鱼卵)放置 28.5 ℃ 培养箱。30 分钟后即可观察受精情况。
来源:丁香实验