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蛋白质修饰
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RNA 足迹和修饰干扰分析实验
RNA 足迹和修饰干扰分析(RNA footprinting and modification interference analysis)是用来研究 RNA 与蛋白质相互作用的技术。RNA 测序及其结构分析的原理是 RNA 足迹试验的理论基础,它们都是建立在变性、半变性或自然条件下采用碱基特异性 的试剂来切割用放射性同位素标记了末端的 RNA 的方法之上。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。
实验概况收录 1 操作方法 · 3 相关文章
抗体可变区( V 区)的克隆、表达和修饰
基于 PCR 的克隆方案利用了可变区中框架区和先导区的保守序列,尽管用框架区中的保守序列可合成引物,用于克隆可变区,但会引起框架区中氨基酸的改变,从而影响抗原结合。因此,用保守的疏水先导序列合成引物是比较好的方案。
实验概况收录 1 操作方法 · 3 相关文章
Maxam-Gilbert化学修饰
一、取待测DNA片段,既可以是单链也可以是双链。 此法又叫化学切割法,或化学降解法,切割之前先对待测片段作末端标记。用放射性P32-磷酸集团标记链的末端之一。 二、将标记完的样品,分成四份。分别采用不同的化学试剂对所得样品,进行修饰进而切割(切割就是利用特异的化学试剂,修饰DNA分子中不同的碱基,使被修饰的碱基之间的连接变得不稳定,发生断裂,而产生各种长度的DNA片段。) 【四组切割的方法,在G、G+A、T+C、C处切割】 "+就是同时切割,有点讨厌的是这点,能修饰A,使其糖苷键不稳定的甲酸
操作方法所属实验:DNA 测序
RNA足迹和修饰干扰分析实验
的 ENU,上清用做碱基修饰试剂。37. 10X ENU 修饰缓冲液:500 mmol/L HEPES-KOH ( pH 8.0),10 mmol/L EDTA,过滤除菌并储存于 -20℃。38. I2 储存液:用乙醇配制成 10 mmol/L。39. 2X 硫酸二甲酯抽提缓冲液:50 mmoI/L Tris-HCl ( pH 7.4 ),300 mmol/L NaCl, 0.05% NP-40,10 μg/ml tRNA,1% SDS,125 mmol/L 巯基乙醇,过滤除菌并储存于 -20℃。40
操作方法所属实验:RNA 足迹和修饰干扰分析实验
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表观遗传学中组蛋白的修饰

表观遗传是指 DNA 序列不发生变化但基因表达却发生了可遗传的改变,即基因型未发生变化而表型却发生了改变。换言之,这是一种 DNA 序列外的遗传方式。因素如 DNA 甲基化、组蛋白修饰和 miRNA 是对环境刺激因素变化的反映,这些表观遗传学因素相互作用以调节基因表达,控制细胞表型,所有这些表观遗传学因素都是维持机体内环境稳定所必需的,有助于正常生理功能的发挥。 组蛋白的翻译后修饰不仅与染色体的重塑和功能紧密相关,而且在决定细胞命运、细胞生长以及致癌作用的过程中发挥着重要的作用,如组

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蛋白质翻译后修饰(PTMs)概述

蛋白质翻译后修饰 (Protein translational modifications,PTMs) 通过功能基团或蛋白质的共价添加、调节亚基的蛋白水解切割或整个蛋白质的降解来增加蛋白质组的功能多样性。这些修饰包括磷酸化、糖基化、泛素化、亚硝基化、甲基化、乙酰化、脂质化和蛋白水解,几乎影响正常细胞生物学和发病机制的所有方面。因此,识别和理解 PTM 在细胞生物学和疾病治疗和预防的研究中至关重要。 看到一篇 Thermo Fisher的文章,关于翻译后修饰Post

文章资讯2403 阅读
抗体的化学和蛋白水解修饰实验
本章旨在为那些需要自己修饰抗体的研究人员提供实践指导。内容涵盖了保留 IgG抗体其抗原结合功能的常见化学和蛋白质水解修饰方法。过于剧烈的修饰方法则因导致广泛蛋白质变性和功能失活而不在此讨论。抗体的放射性标记也不包括在本章范围内。本章将提供典型修饰的详尽反应流程,同时也将对其基本原理加以解释,但不会涵盖全部修饰反应的方方面面。为了更加全面地理解化学和蛋白质水解修饰技术,包括放射性标记技术,推荐读者阅读 Hermanson[1] 的著作。作者:霍华德,本实验来自「抗体制备与使用实验指南」
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翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验
蛋白质翻译后修饰 (PTM) 在细胞生物调节中发挥着基本作用。PTM 是 mRNA 翻译后蛋白质的酶促共价化学修饰。蛋白质化学修饰非常重要,因为它们会潜在地改变蛋白质的物理或化学性质、组成、活性、细胞定位或稳定性。实际上,在氨基酸或蛋白质的 N 端或 C 端加入或移除化学基团会导致大部分蛋白质发生变化。一些 PTM 可以被动态地添加或移除,这是一种可逆的蛋白质功能调控机制。目前超过 400 个特定的蛋白质修饰已被鉴定,也许还有更多的修饰类型有待发现 (CreasyandCottrell
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Morpholino修饰斑马鱼基因
Morpholino 修饰斑马鱼基因,是使基因表达沉默,修饰基因的剪接,或者阻止 miRNA 的成熟及活性。Morpholinos 并不降解其靶向 RNA,而是在与靶序列结合后,以一种 RNA 酶依赖的空间位阻效应来发挥作用。
操作方法所属实验:斑马鱼遗传修饰技术
基本方案1 在成年小鼠脑内植入遗传修饰过的细胞
1.为移植开始培养基因修正的细胞,收获 80%~90% 的汇合度的细胞。手术时,当麻醉和准备动物的时候准备好悬浮细胞(支持方案)。手术期间,每 30~60 min 重悬细胞。2.参考鼠脑图像决定注射位置,通过 anterior-posterior 和 medial-lateral 坐标假定脑功能区定位支架的前肉点,通过垂直坐标假定硬脑脊膜。3.麻醉一个成年的宿主,注射 0.25 ml 麻醉液,每 160 g 体重和标记动物加 1 个耳打孔器或耳标。4.放置好一个麻醉小鼠在一个脑功能区定位区域
操作方法所属实验:脑的基因转移:间接体内法和直接体内法
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【求助】癌基因修饰

太阳星辰 谈到癌基因修饰时,是指那些甲基化、磷酸化?还是指用某种基因去修饰癌细胞? 我对这个概念不太清楚,请各位老师赐教! 太阳星辰 帮帮忙,老师要求查文献写综述,可我查了一下午好像也没弄明白。 开始理解的是表观遗传学,后来感觉又觉得不对。 我检索时应该用什么关键词呢? zhujoker 其实癌基因很多,你老板这样跟你说是不负责任的,不过在很大程度上也是为了锻炼

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组蛋白修饰的类型

    ​​ 组蛋白修饰详情 乙酰化 乙酰化是最早发现的影响转录调控的组蛋白修饰之一,因此目前研究的最多。乙酰化使 从核小体伸出 的 N-末端组蛋白尾部的赖氨酸残基带负电荷,这些负电荷会排斥带负电荷的 DNA,导致染色质结构 松弛。开放的染色质构象允许转录因子结合并显著增加基因表达 (Roth et al., 2001)。 组蛋白乙酰化参与细胞周期调控、细胞增殖和凋亡,并在调节细胞分化、DNA 复制和修复、核输入和 神经元抑制等多种细胞过程中发挥重要作用。组蛋白乙酰

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RNA 甲基化修饰水平测定
RNA 甲基化修饰水平测定
实验概况收录 2 操作方法 · 2 相关问答 · 3 相关文章
斑马鱼遗传修饰技术
斑马鱼遗传修饰技术,是像线虫、果蝇一样,显微注射 mRNA 和 Morpholino,进行基因过量表达或下调表达,使用反向遗传学研究策略如 ZFNs、TALENs 等进行遗传学研究。目前用于斑马鱼遗传修饰技术得到方法主要有 3 种:Morpholino 修饰斑马鱼基因、显微注射质粒 DNA 技术修饰斑马鱼基因、Tol2 转座子介导基因转移技术修饰斑马鱼基因。
实验概况收录 3 操作方法 · 3 相关文章
🔥 m6A 甲基化修饰水平测定
使用 EpiQuik m6A RNA Methylation Quantification Kit 测定 m6A 甲基化修饰水平的步骤如下:1、样品准备:利用 Trizol 法从组织或细胞中提取 Total RNA,24 孔板每孔 200 ng;2、试剂配制:将 WB(Wash Buffer)、CA(Capture Antibody)、DA(Detection Antibody)、ES(Enhancer Solution)进行稀释;3、RNA 结合:取出所需 strip 条,剩下的包裹好放入
操作方法所属实验:RNA 甲基化修饰水平测定
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