简介
Morpholino 修饰斑马鱼基因，是使基因表达沉默，修饰基因的剪接，或者阻止 miRNA 的成熟及活性。Morpholinos 并不降解其靶向 RNA，而是在与靶序列结合后，以一种 RNA 酶依赖的空间位阻效应来发挥作用。
原理
Morpholino 修饰斑马鱼基因的基本原理是利用吗琳环（Morpholino，MO）与核糖核苷酸中五元碳环的结构类似性、人工合成针对特异基因的 MO，可以达到抑制其 mRNA 翻译出功能蛋白的效果。Morpholino oligos 可以使基因表达沉默，修饰基因的剪接或者阻止 miRNA 的成熟及活性。Morpholinos 并不降解其靶向 RNA，而是在与靶序列结合后，以一种 RNA 酶非依赖的空间位阻效应来发挥作用。
材料与仪器
器材：
拉针仪、显微注射器、持针器和显微操纵器、体视显微镜
试剂：
Morpholino 样品
步骤
Morpholino 修饰斑马鱼基因的基本过程可分为如下几步：
（一）流程一
A. 根拟 mRNA 的翻译起始点序列设计一个 MO；
B. 在体内与这种 mRNA 相结合，进而阻止了核糖体的结合，达到阻止其翻译合成蛋白的目的。
注意事项：效果通常利用翻译起始位点附近序列和绿色荧光蛋白 GFP 的融合蛋臼与 MO 共同注射来检验。
（二）流程二
A. 根据前体 RNA 来设计 MO；
选择的序列位于内含子与外显子的交接处，这样设计的 MO 则可以通过结合到内含子-外显子交接处阻止剪接复合体的结合，进而产生非正常的成熟 mRNA。
注意事项
效果通常用反转录 PCR 观测是否出现正常长度的产物来检验。
常见问题
常见问题 1
问题表现：MO 的效果
可能原因：由于体内的 P53 信号的激活等原因，所有的 MO 都会多多少少对胚胎的发育造成一定的影响，比如发育迟缓等，所以比较注射了 MO 的胚胎和对照组胚胎的时候，应当在同一发育程度来比较，而不是以同样的生长时间为参照。
解决方案：一般可以针对同一靶基因同时合成两三条不同的 MO, 然后检验其对胚胎发育的影响是否一致
常见问题 2
问题表现：MO 的特异性
解决方案：一般会采用 Rescue 的方法。通常的做法是体外转录合成靶基因的 mRNA、与其 MO 共同显微注射，视其能否恢复或部分恢复到注射之前的生物学效应。
来源：丁香实验
