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斑马鱼遗传修饰技术

实验分类:

实验动物

别名:

Gene-modified technology for Zebrafish

最新修订时间:

简介

斑马鱼遗传修饰技术,是像线虫、果蝇一样,显微注射 mRNA 和 Morpholino,进行基因过量表达或下调表达,使用反向遗传学研究策略如 ZFNs、TALENs 等进行遗传学研究。目前用于斑马鱼遗传修饰技术得到方法主要有 3 种:Morpholino 修饰斑马鱼基因、显微注射质粒 DNA 技术修饰斑马鱼基因、Tol2 转座子介导基因转移技术修饰斑马鱼基因。

原理

Morpholino 修饰斑马鱼基因的基本原理是利用吗琳环(Morpholino, MO)与核糖核苷酸中五元碳环的结构类似性、人工合成针对特异基因的 MO,可以达到抑制其 mRNA 翻译出功能蛋白的效果。Morpholino oligos 可以使基因表达沉默,修饰基因的剪接或者阻止 miRNA 的成熟及活性。Morpholinos 并不降解其靶向 RNA,而是在与靶序列结合后,以一种 RNA 酶非依赖的空间位阻效应来发挥作用。

来源:丁香实验团队

操作方法

Morpholino修饰斑马鱼基因

Morpholino 修饰斑马鱼基因,是使基因表达沉默,修饰基因的剪接,或者阻止 miRNA 的成熟及活性。Morpholinos 并不降解其靶向 RNA,而是在与靶序列结合后,以一种 RNA 酶依赖的空间位阻效应来发挥作用。

显微注射质粒DNA技术修饰斑马鱼基因

显微注射质粒DNA技术修饰斑马鱼基因,是通过使用组织特异性的启动子以及荧光标记基因,综合斑马鱼胚胎的诸多优势,特别是早期发育通体透明,易于观察的特点,获得转基因斑马鱼。

Tol2转座子介导基因转移技术修饰斑马鱼基因

Tol2 转座子介导基因转移技术修饰斑马鱼基因,是使用在青鳉鱼中发现的 Tol2 转座子获取转基因斑马鱼。

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