基本方案1 在成年小鼠脑内植入遗传修饰过的细胞

遗传修饰细胞的培养 成年宿主小鼠 聚烯吡酮磺溶液
麻醉剂
小鼠大脑图片集 耳打孔器 带有电极操作的脑定位支架以及汉密尔顿注射夹 外科用具 bulldog 磁夹 海绵 中号镊子 伤口夹 26G针 汉密尔顿注射器

1.为移植开始培养基因修正的细胞，收获 80%~90% 的汇合度的细胞。手术时，当麻醉和准备动物的时候准备好悬浮细胞（支持方案）。手术期间，每 30~60 min 重悬细胞。

2.参考鼠脑图像决定注射位置，通过 anterior-posterior 和 medial-lateral 坐标假定脑功能区定位支架的前肉点，通过垂直坐标假定硬脑脊膜。

3.麻醉一个成年的宿主，注射 0.25 ml 麻醉液，每 160 g 体重和标记动物加 1 个耳打孔器或耳标。

4.放置好一个麻醉小鼠在一个脑功能区定位区域。以维持啮鼠动物脑在正确的位置，插人耳棒，小心在计算好的刻度上系紧。准确放置口棒。

5.在皮肤上开个小口，位于眼耳中线。用 10 号解剖刀分开皮肤并清洁皮肤，去除血和粘连组织。

6.确定前肉点，确定坐标，在头盖骨上开一个 1mm 直径的孔，用 26G 针切除硬脑脊膜。

7.用吸管轻轻吹打以重新分开细胞悬液。吸 1~3ul 75000~300000 个细胞每注射点。在脑功能区定位支架上装好带有 5ul 汉密尔顿注射器的电操纵器，并避免气泡。

8.轻轻注射溶液，并使注射速度低于 1ul/min。当注射完毕时，抬起针头 1 mm，静置 2 min，收针。

9.如果多于两个注射点，在新坐标上再打一个 1 mm 直径的孔，重复注射操作。避免每只小鼠注射量大于 10ul。

10.拿开小鼠，清洁头盖骨，用抗菌素消毒。用伤口架子夹紧皮肤，把动物转移至恢复笼子。