基本方案3 植入基因修正的细胞到胎鼠脑内

基因修正的细胞 计时的怀孕鼠
麻醉液 乙醇 眼油膏 抗菌素
加热板 手术用具 眼构造 鼠脑图谱 汉密尔顿注射器 术后恢复笼

1.为移植开始培养基因修正的细胞，收获 80%~90% 的汇合度的细胞。手术时，当麻醉和准备动物的时候准备好悬浮细胞（支持方案）。手术期间，每 30~60 min 重悬细胞。

2.每 160 g 体重用肌肉注射 0.25 ml 的麻醉液麻醉计时的怀孕鼠。刮腹部并用 75% 的乙醇消毒。用眼膏使小鼠眼睛保持湿润。放置麻醉鼠在 37°C 加热板，上面盖消毒纸巾。

3.做剖腹产，移除子宫的角质。透照以确定胚胎解剖学结构并确定端脑的小囊泡和颅盖的缝。参考产前的鼠脑图谱。

4.用吸管轻轻吹打以重新分开细胞悬液。吸 1~3ul 至 5ul 汉密尔顿注射器，并避免气泡。

5.需要慢速注射入脑的薄壁组织或胚胎脑室内。当注射完毕时，抬起针头 1 mm，静置 2 min，收针。

6.如果多于两个注射点，重复第 4~5 步。之后重复注射步骤于每个胚胎。

7.把子宫角质重新放回腹部内。缝合并消毒。转移妈妈至恢复笼，允许它恢复并生产。