基本方案2 植入基因修正的细胞到新生的小鼠脑内

基因修正的细胞 新生小鼠
乙醇 抗菌素 外科胶水
汉密尔顿注射器 显微操作仪 手术用具 幼鼠脑图谱 加热板

1.为移植开始培养基因修正的细胞，收获 80%~90% 的汇合度的细胞。手术时，当麻醉和准备动物的时候准备好悬浮细胞（支持方案）。手术期间，每 30~60 min 重悬细胞。

2.将新生幼鼠置于湿冰 5 min 以麻醉。之后用 100% 乙醇灭菌头部。将麻醉的幼鼠放于脑功能区定位支架在显微操作仪下。

3.麻醉一个成年的宿主，注射 0.25 ml 麻醉液，每 160 g 体重和标记动物加 1 个耳打孔器或耳标。用显微解剖镊子拉紧之后清洁并干燥头盖骨表面以去除血液和粘连组织。

4.确定前 0 点，通过新生鼠脑图谱确定坐标，确定头盖骨上的注射位置并用 11 号手术刀在软骨的头盖骨上开一个 1mm 直径的孔。

5.用吸管轻轻吹打以重新分开细胞悬液。吸 1~2ul。在脑功能区定位支架上装好带有 5ul 汉密尔顿注射器的电操纵器，并避免气泡。

6.轻轻注射溶液，并使注射速度低于 1ul/min。当注射完毕时，抬起针头 1 mm，静置 2 min, 收针。

7.如果多于两个注射点，重复第 4?6 步。

8.拿开幼鼠，清洁头盖骨，用抗菌素消毒。用伤口架子夹紧皮肤，用 37°C 的热板复苏幼鼠当其恢复活动能力时把动物转移至母鼠身边。