Western Blot 一抗孵育4℃过夜，有时间范围吗？时间长度的上限或下限

主要是要看个人实验，根据蛋白和抗体性质决定，过夜是大部分实验要求，一般不超过12小时（abcam和赛信通），当然也有例外，有个博后师兄做线粒体自噬，因为新冠孵了3-4天（sigma），后面反而得到一个好结果，发了一篇nature

都是说一抗孵育过夜，具体时间没有说，其实没有什么时间上线和下限，但是最好不要超过一天，否则杂带会很多，也可能导致蛋白降解。

一般情况下，在37℃的条件下，孵育1-2小时左右。在室温的条件下，孵育3小时左右。在4℃的条件下，孵育18-24小时左右。

表达高的蛋白孵育12h左右，表达低的蛋白或者结合能力比较弱的抗体可能要24甚至48h

Western Blot 一抗孵育的时间应该根据实验需要和一抗的性质来确定，通常需要进行优化。一般来说，一抗孵育的时间范围可以在1小时至过夜之间。如果您需要进行快速检测，可以选择较短的一抗孵育时间；如果您需要检测较弱的蛋白质信号，则可以选择较长的一抗孵育时间。在孵育过程中，可以不断检测蛋白质信号的强度，以确定一抗孵育的最佳时间。需要注意的是，过长的一抗孵育时间可能会导致非特异性结合，从而影响检测结果的准确性。

没有严格的时间限制，10小时内都可以

在4°C的条件下，孵育18-24小时左右

通常，孵育时间的下限是约2-4小时，这是为了确保充分的抗体结合。而上限通常是24-48小时，因为超过这个时间，可能会增加背景信号或导致抗体降解。

然而，最适合的孵育时间可能因抗体的类型和特异性以及目标蛋白的丰度等因素而异。因此，可能需要根据实验条件和结果进行一些优化。如果你发现信号较弱或背景较高，可能需要考虑调整一抗的孵育时间。

没有时间范围，过夜是指8-12h，久一点也没事